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研究哺乳动物卵母细胞的激活及其孤雌胚的发育，有利于探索卵母细胞的生理反应，分析理化激活与精子激活的特征，对阐明哺乳动物卵母细胞的激活、受精和发育机理，解答这些重要的生命现象及技术的应用具有重要意义。同时也可为核移植的研究提供技术参考。IP3是影响细胞激活的关键因子。本实验利用电激活过程中卵母细胞膜上形成的瞬间孔洞，向卵子内导入一定量的IP3，通过IP3第二信使途径，打开胞内钙库，模仿自然受精过程中卵母细胞内Ca2+的波动性变化，研究电场导入IP3对小鼠卵子的激活作用。该法排除了胞质注射IP3时人为因素的干扰，并克服了一次性注射的不科学性，保证了结果的可靠性。 实验以宁波新科CRY-3细胞融合仪及其配备的镀银电融合槽（电极宽度为0.5mm）作为主要实验仪器。首先对影响电激活的诸多因素，如：直流脉冲的强度（1.0kv／cm、1.5kv／cm、2.0kv／cm、2.5kv／cm）、脉冲宽度（40μs、80μs、100μs、150μs）、脉冲次数（1次、2次、3次）、激活液中的离子成分(无Ca2+、Mg2+离子的0.3mol／L甘露醇溶液，0.3mol／L甘露醇+0.05mmol或0.1mmol／LCaCL2+0.1mmol／LMgCL2的激活溶液)以及卵母细胞的卵龄（注射hCG后12-13h、15-16h、18-19h、22-23h）进行了比较研究。结果表明：（1）相同卵龄卵母细胞的激活率随电场强度、脉宽和激活次数的变化而变化。脉宽和激活次数不变的情况下，卵母细胞的激活率随电场强度的增加而升高。场强为2.0kv／cm时，激活率和卵裂率分别达到了74.47％和77.14％，显著高于1.0kv／cm和1.5kv／cm试验组（48.94％，47.83％；61.70％,55.17％，P＜0.05）；场强继续升高，卵母细胞的激活率和卵裂率反而开始下降。场强升高到2.5kv／cm时，卵母细胞的激活率下降到68.85％，卵裂率（46.88％）与2.0kv／cm试验组相比显著降低（P＜0.05）；2.0kv／cm场强下，脉宽为80μs时，卵母细胞的激活率达到77.78％，显著高于40μs试验组（46.67％，P＜0.05）。脉宽进一步增加并不能继续升高卵母细胞的激活率；卵母细胞的激活率也随激活次数的增加而升高，卵子经多次激活处理后，激活率、卵裂率和囊胚发育率都明显升高，本实验采用3次连续电脉冲（每次间隔10min）处理卵子，得到的激活率和囊胚发育率（89.58％，20.59％）显著高于1次（60.42％，14.28％）和2次处理组（70.83％，11.54％，P＜0.05）。（2）Ca2+、Mg2+对小鼠卵母细胞的电激活有较大影响。使用含Ca2+、Mg2+离子的激活液得到的卵母细胞激活率显著高于不含Ca2+、Mg2+激活液组（P＜0.01）。Ca2+的浓度变化对激活效果无显著影响——（＞0刀5卜臼）卵龄对卵母细胞的孤雌激活也有影响，卵母细胞的活化率随卵龄的增加而明显升高，注射比G后18－19h的卵母细胞激活率（71．67O）显著高于 12－13h和 15－16h的卵母细胞组（分别为7．50％和55．83％，P＜0．01）；而22h以后的卵母细胞激活率、卵裂率和囊胚发育率开始下降历5，83O、70．880和 12．50O)，但与 18l 的卵母细胞组无明显差异o＜0刀5)。 综上所述，在本实验室条件下，以含Ca刀、Mgh的甘露醇溶液为激活液，采用2刀by／cm强度、80呷脉宽、连续3次脉冲（每次间隔10min）刺激注射hCG后18二9h的小鼠卵母细胞，可获得较为理想的激活效果。 在电激活参数确定的基础上，本实验利用电场导入 IP3的方法激活注射 hCG后 18上的小鼠卵母细胞，研究了 IP3及其浓度变化对卵母细胞电激活效果的影响。结果表明：门)无钙激活液中加入 25 11 3OI几的 IP3得到的卵母细胞激活率和卵裂率门250％和 77二7％)与单纯电激活相比显著升高N＊50％和58．33％，P＜0刀5人说明1巳可通过电导法进入细胞内，诱导小鼠卵母细胞的激活。u)在 lPs试验浓度门5巧00u mol几)范围内，卵母细胞的激活率无明显变化（分别为 71．11o，77．780，85．710和 77．140，p＞0．05人但都显著高于单纯电激活方法Q3．33o，p＜0．of入未添加 lp。试验组的孤雌囊胚发育率①．00％）与25闷ol／L（26．09％）和50卜mo凡（29石3％）试验组相比无明显差异（P＞0刀5），而与 100Vmol几（3·93％）和500Vmol 几（3 刀O％）试验组相比显著降低（P＜O刀5）。100Hm。l几试验组的卵母细胞激活率、卵裂率以及囊胚发育率与500Pmol／L试验组相比无明显差异o＜0．05卜实验表明，激活液中添加适量 IP。可提高卵母细胞的电激活率。IP。浓度达 100pmol／L时，可有效提高卵母细胞的囊胚发育率。继续增加 IP。的浓度，卵母细胞的激活率和卵裂率无明显变化。