急性髓系白血病CD34+/CD123+白血病干细胞ID4、CDH13基因甲基化研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:l100890628
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[目的]探讨初治、缓解及复发/难治性AML(非M3型)患者骨髓中CD34+/CD123+白血病干细胞数量与AML预后的相关性;进一步探索CD34+/CD123+白血病干细胞ID4、CDH13基因甲基化状态对AML疾病转归的影响,旨在为AML缓解后的巩固、维持治疗及去甲基化靶向治疗提供理论依据。[方法]1、收集20例AML(非M3)患者骨髓标本及相关临床资料(分型、分期、细胞遗传学等临床信息);通过免疫磁珠分选方法对AML患者骨髓标本进行分选,获得CD34+/CD123+白血病干细胞;通过流式细胞术检测CD34、CD123抗原表达情况,探讨CD34+/CD123+白血病干细胞与AML预后关系,同时评估免疫磁珠分选效果。2、提取分选后所得CD34+/CD123+白血病干细胞基因组DNA,通过甲基化特异性PCR(MSP)方法检测其ID4、CDH13基因甲基化情况,探究CD34+/CD123+白血病干细胞ID4、CDH13基因甲基化情况及其与AML预后相关性。[结果]1、免疫磁珠分选结果显示:行CD34免疫磁珠行阳性分选后,CD34+细胞纯度为(74.87±10.49%)细胞得率为(21.77±8.26%),行CD123免疫磁珠分选后,CD34+/CD123+细胞纯度为(68.29±12.99%),细胞得率为(16.35±3.51%)。2、在初治、复发/难治及CR患者骨髓细胞中均分选出不同数量CD34+/CD123+白血病干细胞,在正常对照组中,CD34+/CD123+细胞几乎未分选出。CD34+细胞比例复发组最高,均数为62.72%,CR组最低,均数为4.73%,两组比较P<0.05,差异有统计学意义。CD34+/CD123+白血病干细胞比例复发难治组最高,均数为23.41%,CR组最低,均数为2.91%,两组比较P<0.05,差异有统计学意义。初治组分别与复发难治组及CR组比较,P均>0.05,差异无统计学意义。3、MSP结果显示:3.1 ID4基因甲基化在复发/难治组最高,为100%,CR组最低,为60%,初治组为77.78%,在正常对照组中未检测出甲基化,行两两比较,P均<0.05,差异有统计学意义。3.2 CDH13基因甲基化在复发难治组最高,为66.67%,CR组最低,为20%,初治组为55.56%,正常对照组未检测出甲基化,行两两比较,P均<0.05,差异有统计学意义。3.3 ID4、CDH13基因同时存在甲基化在复发难治组最高,为66.67%,初治组为44.44%,CR组为0,行两两比较,P均<0.05,差异有统计学意义。[结论]:1、免疫磁珠法可有效分选出CD34+/CD123+白血病干细胞。2、CD34+/CD123+白血病干细胞比例在复发难治组最高,在CR组最低,与AML预后相关,比例越高,预后越差,被认为是AML复发的根源之一,有可能作为AML临床治疗的靶点以及MRD监测手段之一。3、ID4、CDH13基因在AML患者CD34+/CD123±白血病干细胞中均存在不同程度甲基化,推测异常甲基化发生的广泛程度与AML预后相关,发生异常甲基化的基因越多,其预后越差,基因异常甲基化程度有可能作为判断AML预后的指标之一;在AML的治疗,尤其是在巩固、维持治疗中,针对LSCs去甲基化靶向治疗具有一定的价值。
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