论文部分内容阅读
目的：通过生物信息学方法预测德国小蠊过敏原Bla g2的B细胞和T细胞表位；采用定点突变计算结合能获得关键氨基酸，并通过分子动力学模拟对其进行评价，以验证筛选得到关键氨基酸，为制备低致敏原衍生物及过敏原疫苗提供理论依据。 方法:①运用DNAStar Protean、BPAP和BepiPred1.0三种方法预测 Bla g2的B细胞抗原表位；联合 Net-MHCIIpan-3.0和Net-MHCII-2.2方法预测Bla g2的T细胞表位。②使用FoldX软件对所获得的B细胞抗原表位进行氨基酸位点突变和评分，以获取关键氨基酸位点。③采用Swiss-PDBviewer软件对关键氨基酸位点进行突变构建野生型复合物 wcBla g2及4个突变型复合物（Bla g2-D201A、 Bla g2-E233A、Bla g2-E233R、Bla g2-K251A）。④应用 GROMACS软件对构建的5个复合物分子进行分子动力学模拟，并计算Bla g2突变前后与单克隆抗体m4c3结合自由能的变化。 结果：①预测得到Bla g2的8个B细胞表位肽，分别是：第1号肽55KYEKLKP61、第2号肽79SAVGRGIE86、第3号肽124AAPGCPNAL132、第4号肽157RFQDGE162、第5号肽200GDTTVAPAGTQAIID214、第6号肽223PKAYVNPINE233、第7号肽241TRRICKLDCSKIPSL255、第8号肽288PXGHSDHF295；联合Net-MHCIIpan-3.0和Net-MHCII-2.2预测得到Bla g2有2条强结合的T细胞表位（IC50＜50nm）和34条弱结合的T细胞表位（50nm＜IC50＜500nm）。②通过FoldX软件成功筛选到第5肽中的200、201、202号、第6肽中第230、233号及第7肽中第251、253号共7个关键氨基酸位点。③成功构建野生型复合物wcBla g2及4个突变型（Bla g2-D201A、Bla g2-E233A、Bla g2-E233R、Bla g2-K251A）复合物共5个动力学模拟体系。④动力学模拟的结果表明：相对于野生型复合物wcBla g2，Bla g2的D201A、E233A、E233R、K251A突变后结合能降低。 结论：基于生物信息学方法预测筛选德国小蠊过敏原Bla g2的抗原表位中的关键氨基酸突变点，并对其进行突变体计算机模拟改造，可为发展蟑螂过敏原低致敏原衍生物及过敏原疫苗提供新的依据。