背景葡萄膜炎是一组累及葡萄膜、玻璃体、视网膜和视网膜血管的炎症，也被称为眼内炎症。由于葡萄膜炎的发病部位或累及组织不同，在临床上类型众多。如根据病因可分为感染性、外伤性、自身免疫性葡萄膜炎等，根据炎症所在位置可分为前、中间、后及全葡萄膜炎，而根据与全身性疾病的关联又可分为Fuchs综合征、Behcet病（Behcet’sdisease，BD）、Vogt-小柳原田综合征（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome，VKH）等。Behcet病是一种以葡萄膜炎、多形性皮肤损害、口腔溃疡、生殖器溃疡等为特征的多器官、多系统受累的疾病。Vogt-小柳原田病也是一种累及全身多个系统的炎症性疾病，主要表现为脉络膜炎、脉络膜视网膜炎、视乳头炎、神经视网膜炎和肉芽肿性全葡萄膜炎，常伴有皮肤和毛发改变、听觉功能障碍、脑膜刺激征等全身性表现。该两种疾病所致的葡萄膜炎均受累组织广泛、发作频繁、治疗困难、预后差，属葡萄膜炎中处理最为棘手的类型范畴，也属我国葡萄膜炎中常见类型范畴[1]。它们的病因和发病机制均尚不完全清楚，目前有细菌感染学说、病毒感染学说、自身免疫学说等多种学说。自身免疫学说是目前广为人们所接受的一种学说，研究较多也较明确的自身免疫因素便是CD4+T细胞包括Th17、Th1、Treg细胞，及一些炎症因子包括IL-17、IFN-γ、IL-10等[2-11]。肝X受体（liver X receptor, LXR）是核受体的一种，对其功能的报道早年主要是关于脂质代谢方面[12]，近期越来越多的研究发现其在炎症及免疫调节上有重要的作用，如对CD4+T细胞及多种炎症因子有调节作用[13-15]。肝X受体活化的激动剂有内源性氧化胆固醇衍生物包括22（R）-羟固醇、24（S）-羟固醇、27-羟固醇等，和合成激动剂如T0901317、GW3965[16-20]。因此我们进行以下实验：1.肝X受体在Behcet病患者中表达水平的研究；2.肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中表达水平的研究；3. GW3965对CD4+T细胞功能的影响及其机制的研究。从而研究肝X受体会不会是引起Behcet病或Vogt-小柳原田病发病的重要因素，为这类难治、易复发的棘手疾病的治疗提供新的方向和思路。第一部分肝X受体在Behcet病患者中表达水平的研究目的：研究肝X受体在Behcet病患者中的表达水平及其与疾病活动性的相关性。方法：将从正常人和Behcet病患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs）。提取PBMCs的总RNA并反转录成cDNA，用实时荧光定量PCR（Polymerase chainreaction）（RT-qPCR）的方法检测PBMCs中LXR的表达。对分离出的PBMCs使用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用流式细胞技术检测正常人及病人CD4+T细胞中LXR的表达。结果：1.活动期Behcet病患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均显著低于正常人。2.静止期Behcet病患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。3. Behcet病患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）LXRα在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。结论：我们的研究表明：Behcet病葡萄膜炎患者PBMCs中LXRβ的mRNA的表达低于正常对照，纯化的CD4+T细胞中LXRβ的蛋白的表达亦低于正常对照。说明与正常人相比，LXRβ的表达在BD病人中存在差异，提示与疾病存在相关性。另一亚型LXRα在PBMCs与CD4+T细胞水平均无改变。LXR的表达只在眼部炎症活动期的葡萄膜炎患者中降低，而在静止期则不然，表明其与该病的疾病发展存在某种关联。第二部分肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中表达水平的研究目的：研究肝X受体在Vogt-小柳原田综合征患者中的表达水平及其与疾病活动性的相关性。方法：将从正常人和Vogt-小柳原田综合征患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离PBMCs。用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用RT-PCR和流式细胞技术检测LXR的表达。结果：1.活动期Vogt-小柳原田综合征患者LXRβ在PBMCs中mRNA水平的表达显著低于正常人，静止期患者的表达则无明显差异。2.活动期和静止期的Vogt-小柳原田综合征患者LXRβ在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无显著差异。3. Vogt-小柳原田综合征患者（包括疾病活动程度为活动期和静止期的患者）LXRα在PBMCs中mRNA水平的表达及在纯化的CD4+T细胞中蛋白水平的表达均与正常人无明显差异。结论：第一部分和第二部分的结果表明：Behcet病和Vogt-小柳原田综合征患者PBMCs中LXRβ的mRNA的表达均低于正常对照，提示与疾病存在相关性。Behcet病患者中纯化的CD4+T细胞中LXRβ蛋白的表达亦低于正常对照，而Vogt-小柳原田综合征患者则与正常无差异，分析可能是PBMCs中LXRβ的低表达主要不存在于CD4+T细胞中而是PBMC中的其他种类细胞。第三部分GW3965对CD4+T细胞功能的影响及其机制的研究目的：肝X受体在免疫调节中的作用尚不完全清楚。本部分研究探讨LXR对CD4+T细胞的作用及其可能的机制，从而明确LXR在BD和VKH疾病发病中的作用。方法：将从正常人和患者（包括活动期Behcet病和活动期Vogt-小柳原田综合征患者）静脉新鲜抽取的外周血进行密度梯度离心，以分离PBMCs。用人CD4+T细胞磁珠进行细胞分选，收集CD4+T细胞。用流式细胞技术和ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附试验）的方法检测LXR对CD4+T细胞功能的影响。用RT-PCR和流式细胞技术研究LXR激动剂GW3965对CD4+T细胞作用的机制。结果：1. GW3965抑制CD4+T细胞对IL-17、IFN-γ的分泌，对IL-10的产生无影响。2. GW3965降低IL-17+、IFN-γ+和IL-17IFN-γ双阳Th细胞占CD4+T细胞的百分比，对Treg细胞的百分比无影响。3. GW3965抑制转录因子RORC和T-bet在mRNA水平的表达。4. GW3965抑制CD4+T细胞的增殖，对CD4+T细胞的凋亡无明显影响。5.在刺激30min时，GW3965显著地降低CD4+T细胞中Nfκ（bNuclearFactor κB，核因子κB） p65(pS529)的磷酸化水平。6.肝X受体的活化伴有载脂蛋白E（apolipoprotein E，ApoE）在mRNA水平表达的上调。结论：结果表明，GW3965可能通过影响转录因子的表达、Nfκb炎症信号通路等机制发挥对CD4+T细胞功能的影响，包括各类效应细胞的百分比、细胞因子的分泌、增殖、凋亡等。提示LXR的活化可通过抑制Th1和Th17细胞的效应来发挥对异常免疫反应进行调节的作用。