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第一部分REM期睡眠剥夺对大鼠海马组织自噬水平的影响目的:探究REM期睡眠剥夺后大鼠海马组织中是否有自噬活动参与及其水平的改变。方法:我们选取SD大鼠为研究对象,将实验动物分为REM睡眠剥夺组、水环境对照组、正常空白对照组,采用改良多平台睡眠剥夺法来建立本实验所需的睡眠剥夺模型,首先选择免疫荧光观察到三组大鼠海马区自噬体的形成;随后利用western blot检测大脑海马组织中自噬相关蛋白表达量的变化。结果:REM期睡眠剥夺后,在免疫荧光下可观察到三组大鼠的海马组织均有自噬体存在;对自噬过程中特征性蛋白LC3B及P62进行WB定量检测后可见:与两个对照对相比,实验组的大鼠海马组织匀浆中LC3B表达明显升高（p<0.05）,P62蛋白表达量下降（p<0.05）。同时两个对照组间LC3B及P62蛋白的表达量相差不大（p<0.05）。结论:REM期睡眠剥夺后大鼠海马组织的自噬活动被激活。第二部分orexin对海马神经元诱导时间、浓度的筛选及对应自噬蛋白的表达目的:观察orexin对体外海马神经元细胞活性及自噬水平的影响。方法:本实验选择大鼠原代海马细胞为研究对象,给予不同浓度梯度(0 mol/L、10-11 mol/L、10-9 mol/L、10-7 mol/L)的orexin干预2小时和时间梯度（0h、2h、4h、6h、8h）10-7 mol/LOrexin进行刺激,利用CCK8试剂盒检测不同干预条件下的细胞活性的变化;另外,针对自噬的改变,首先利用细胞免疫荧光下观察是否有自噬小体存在,随后利用WB对不同时间和不同浓度的orexin干预后自噬蛋白P62进行定量检测选取最合适的实验条件。结果:在刺激2小时的条件下,随着orexin浓度的不断增加海马神经元细胞活性率也逐渐上升,选择浓度10-7 mol/L组与其空白组相比,结果有差异（P<0.05）;而固定orexin的刺激浓度10-7 mol/L后,随着干预时间的延长,海马神经元细胞的活性也呈增高趋势,在4小时节点检测的细胞活性较空白对照组有统计意义（P<0.05）。细胞免疫荧光下可见自噬体的存在;与自噬活动呈负相关的P62蛋白的表达量随着orexin的刺激时间和干预浓度的延长表达含量升高,与空白组相比orexin 10-7 mol/L组及干预4h组的P62蛋白表达均有统计差异（P<0.05）。结论:orexin能增加体外海马神经元细胞活性率,同时对细胞自噬活动产生抑制效应;该功能具有时间和浓度依赖性。第三部分orexin对海马神经元自噬水平影响的可能机制目的:初步探索orexin影响海马神经元自噬活性可能的机制。方法:本实验继续选用海马神经元为研究对象,利用实验二的结果选取刺激条件后(10-7 mol/L、4h),随后从orexin和自噬两方面进行干预,将实验分为空白对照组、orexin组、orexin受体阻滞剂（almorexant）组、自噬激活剂（rapamycin）组、orexin+almorexant组及orexin+rapamycin组。利用WB检测自噬相关蛋白Beclin1、P62的表达水平评估自噬水平的改变,随后对各组标本进行电镜观察,更直观观察自噬体的变化。结果:orexin组beclin1蛋白表达量较空白对照组下降,自噬活动抑制（p<0.05）;加入orexin受体抑制剂组、自噬激活剂的两组细胞,与orexin干预组相比beclin1蛋白表达显著增多,差异具有统计学意义（P<0.05）;若同时加入orexin+其受体阻滞剂或同时加入orexin+自噬激活剂后,则观察到这两组中beclin1蛋白表达水平与对照组数值相差不大（P>0.05）,但较单纯加入orexin组相比较,表达增多（p<0.05）。相反,实验过程中与自噬活性呈负相关的蛋白P62的表达量在加入食欲素（orexin）刺激后表达上升,与对照组相比有统计学意义（P<0.05）;而食欲素受体抑制剂组、自噬激活剂组中P62蛋白表达水平下降,相比与对照组有意义（P<0.05）;同时给予两种刺激（ore+alm、ore+rap）的两组中,P62水平较orexin组更高,且有意义（P<0.05）,但较对照组无明显差异（P>0.05）。结论:Orexin对海马神经元自噬水平的抑制可被orexin受体阻滞剂及mTOR抑制剂所阻断。