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冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronaryatheroscleroticheartdisease,CAD)简称冠心病,是严重威胁人类生命健康的主要疾病之一。虽然近年来各项先进诊疗手段(如溶栓治疗、冠状动脉内旋磨术、经皮冠状动脉介入术、冠脉动脉搭桥术等)逐渐应用于临床,对堵塞血管的开通、濒死心肌的挽救、心肌梗死面积的缩小、心功能的改善发挥了重要的作用,但冠心病的死亡率仍呈逐年升高的趋势,冠心病不仅增加了家庭和社会的经济负担,而且增加了患者的死亡风险。因此,对于冠心病的防治已成为全社会关注的重点。冠心病发病机制主要是由于动脉粥样硬化,不稳定斑块形成。近年来,研究发现,TLR4/NF-κB信号通路所介导的炎症反应参与了动脉粥样硬化及不稳定斑块的形成,最终导致血栓形成、血管闭塞、心肌缺血坏死。目前,冠心病的治疗主要以西医为主,但因西药的一些禁忌症、不良反应和联合用药的毒副作用导致部分冠心病患者不能长期服药。桂枝汤是医圣张仲景的经典药方,对冠心病的治疗已有几千年的历史,疗效确切。本研究旨在观察中药桂枝汤复合方剂的预防性应用对新西兰兔心肌缺血的干预作用及对TLR4/NF-κB信号通路的影响,为临床研发安全有效的中药制剂提供理论依据。目的:本研究旨在探讨桂枝汤复合方剂预处理对新西兰兔心肌缺血的保护作用是否通过TLR4/NF-κB信号通路介导,为临床预防心肌缺血提供理论依据。方法:1.健康清洁级新西兰大白兔36只,体重0.9-1.2 kg,雌雄各半,由河北医科大学实验动物研究中心提供。适应性饲养1周后,按随机数字表法分为3组:假手术组(sham group)、模型组(model group)、药物组(drug group),每组12只。药物组术前给予中药桂枝汤复合方剂(由河北工程大学附属医院中药制剂室制备)(6g/kg/d,换算成容积3ml/kg/d)灌胃2周,假手术组和模型组给予等量蒸馏水灌胃2周。采用结扎左冠状动脉前降支(LAD)法建立动物心肌缺血模型(药物组和模型组),假手术组只穿线不结扎。2.彩色多普勒超声心动图(Color doppler echocardiography,CDE)检测各组新西兰兔结扎前后的心脏射血分数(Ejection fractions,EF)。3.三组动物分别于结扎4h后抽取静脉血,置于EP管中,静置、离心,留取血清,于-80℃冰箱保存备用。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中TNF-α和IL-6的含量。4.抽血结束后,用耳缘静脉注射空气法处死各组动物并留取心肌组织,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织TLR4m RNA的表达,采用免疫组织化学法检测NF-κBp65蛋白的表达。5.采用SPSS19.0统计软件进行分析,计量资料以均数±标准差((X|-)±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法进行检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.心电图变化结扎前,各组动物心电图无明显变化。结扎后,模型组和药物组动物心电图ST段较假手术组明显抬高。2.心脏射血分数检测结扎前,各组动物心脏射血分数无明显差异(P>0.05)。结扎后,与假手术组(71.32±2.49)%相比,模型组(40.57±3.39)%和药物组(59.42±3.56)%动物心脏射血分数均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组(40.57±3.39)%相比,药物组(59.42±3.56)%心脏射血分数有所提高,差异有统计学意义(P<0.05)。3.血清TNF-α和IL-6浓度测定血清TNF-α和IL-6在模型组(58.2±1.4pg/ml、6.11±0.37pg/ml)和药物组的(40.8±2.6pg/ml、4.39±0.32pg/ml)表达高于假手术组(22.3±0.5pg/ml、1.44±0.12pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,药物组表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4.心肌组织TLR4m RNA的表达假手术组TLR4m RNA表达量很少,与假手术组(0.68±0.17)相比,模型组(3.45±0.28)和药物组(2.09±0.14)TLR4m RNA的表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);5.心肌组织NF-κBp65蛋白的表达NF-κBp65在假手术组几乎无表达,模型组(23.8±1.34)和药物组(14.7±1.15)NF-κBp65的表达高于假手术组(3.5±0.28),差异有统计学意义(P<0.05);与模型组(23.8±1.34)相比,药物组(14.7±1.15)表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:上述研究表明,中药桂枝汤复合方剂具有提高心脏射血分数、改善心功能、减少心肌损伤、保护受损心肌的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB介导的信号通路有关。