棒曲霉Asp-195v蛋白酶的特性及其功能cDNA片段克隆的研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangdaojin
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蛋白水解酶催化蛋白质的肽链裂解,是一类在生理学和商业领域中具有广泛应用价值的酶。蛋白酶执行大量的不同的生理功能,几乎参与各种生物体的生理生化反应,包括正常和非正常状态的复杂的病理、生理功能。它们同样也存在于致病生物体的生活史中,所以它们也能够成为潜在的发展治疗因子的对象,来治疗一些可怕的疾病:如癌症和艾滋病等。蛋白酶在食品、皮革、医药、日化、清洁剂等工业中的应用也具有悠久的历史。微生物来源的蛋白酶,由于具有培养简便,产量丰富等优点,适于工业化生产而得以广泛应用。本论文前期对液体发酵的棒曲霉Asp-195v菌株所产蛋白酶的活力进行了条件优化,并通过硫酸铵盐析,Sephadex G-100凝胶层析和DEAE阴离子柱层析从Asp-195v培养的滤液中分离纯化获得了电泳纯的酶蛋白,并对该酶的特性开展了研究工作,结果表明:(1)当培养基成分中麸皮和豆粕的比例为7:3,含水量90mL,初始pH值7,培养时间72h,接种量1.5mL,培养温度24℃,摇床转数120r/min时为最佳培养条件。在最佳培养条件下测得的酶活力高达309.70U。(2)通过硫酸铵盐析,Sephadex G-100凝胶层析和DEAE阴离子柱层析,从Asp-195v培养的滤液中纯化出了一种胞外蛋白酶组分。其分子量为30.1kDa,所得样品被纯化了15.3倍,活力回收率为6.35。(3)该蛋白酶的最适反应温度为40℃,在30℃—50℃温度范围内相对活力可保持在70%以上;最适pH为7,pH稳定范围在4—8;Mn2+对该蛋白酶活力具有明显的激活作用,K+、Ag+、Cu2+、Fe2+、Mg2+、Zn2+、Ca2+、Al3+和Fe3+离子则有明显的抑制作用,尤其是Hg2+和Pb2+对酶活的抑制作用更加强烈;其他试剂如葡萄糖、EDTA对酶活的抑制作用不明显,而蔗糖、SDS、和Tween-20对酶活的抑制明显;以酪氨酸为底物采用双倒数作图法测得Vmax为30.40mmol/min,Km为97.53mmol/L。根据真菌蛋白酶的同源保守序列设计兼并引物,通过RT-PCR及快速扩增,克隆了该蛋白酶的编码功能基因cDNA为517bp,该基因已在GenBank中注册,DNA序列的登陆号为GU455424。研究结果为功能基因全长cDNA扩增和构建高效表达蛋白酶的基因工程菌株奠定了基础。
其他文献
网柄细胞状黏菌(简称网柄菌)是一类介于植物和动物之间的原生动物,它们以细菌为食,形态微小,兼具动植物的细胞特点。因其短暂易重复的生命周期、与哺乳动物相似的细胞学特性及同细菌竞争而演化出的互作关系,在生物学特性及应用方面具有很高的研究价值。本研究对长白山不同生境梯度下网柄细胞状黏菌的多样性进行研究,主要分为三个部分:一、在分类学研究中,共获得14种网柄菌,包括5个已知种(盘基网柄菌Dictyoste
文章通过对贵州省大中型沼气工程建设现状及存在问题的分析,阐述了贵州省大中型沼气工程建设管理的对策及措施,并提出了相应的发展思路。
为解决资本市场中,流通股、非流通股存在的流通制度差异问题,平衡相关股东之间的利益。2005年,国务院开始启动了上市公司股权分置改革的工作,紧接着由中国证监会为主导的各相关部门,发布了一系列指导意见、管理办法等,业绩承诺制度应运而生。业绩承诺这一工具主要应用于并购重组交易,解决并购重组中注入资产的信息不对称问题,防范注入资产因未来预期收益估值法产生的估值过高风险。随着2008年业绩承诺第一次以法规文
从2013年以来,有一些新兴产业开始特别高频率的并购和收购等。这些新兴产业在并购和收购中,绝大部分上市公司都会依照市场化的原则来进行并购,很多公司会在并购中选择签订业绩承诺,这些业绩承诺表现出来了 一种高溢价和高业绩承诺的特征。但是,也出现了某些不负责任的上市公司由于完不成他们的业绩承诺而向中小股东道歉,想要对并购对象被并购时签订的承诺做出改变,对于中小股东的利益造成了严重的危害。所以说,讨论并研
本文主要围绕现代汉语双重否定式双音词“无非”、“莫非”、“莫不”、“无不”和“不无”等五个双音词,在结合前人时贤研究成果的基础上,以语义学、语用学、功能主义语言学等理论为指导,从历时与共时两个角度和句法语义语用三个维度,分析了上述五个双音词在现代汉语中的性质与功用和在历时演化中的演变过程及其动因与机制。除绪论外,全文共分为以下五章内容。绪论:内容包括论述研究对象与研究现状、说明方法理论与研究目标、