论文部分内容阅读
目的:探讨针剌后处理调控阿片δ受体及RISK信号通路保护心肌缺血大鼠再灌注损伤的效应及机制。方法:将SPF级SD大鼠140只,随机分为空白组、模型组、再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、再灌注前后均针刺组、δ-OPR拮抗组、非经非穴组,每组20只。除空白组外,采用手术结扎并再灌注左冠状动脉前降支的方法及腹腔注射ICI174864阻断阿片δ受体表达的方法,建立心肌缺血再灌注模型和拮抗阿片δ受体心肌缺血再灌注模型。造模后分别在再灌注前、再灌注后、再灌注前及后给予大鼠电针内关、神门或非经非穴治疗。通过生理记录仪、TTC染色、Tunel分别检测心电图、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率;运用PCR及Western blot技术检测δ-OPR mRNA及δ-OPR蛋白的表达量;并运用Luminex液相芯片技术检测Akt、Erk、JNK、p38的表达量。结果:1.Ⅱ导联心电图ST段变化与空白组相比,模型组、非经非穴组、再灌注前后均针刺组、δ-OPR拮抗组的ST段抬高显著升高(P<0.01);与模型组相比,再灌注前后均针刺组、δ-OPR拮抗组的ST段抬高显著下降(P<0.01),非经非穴组略有下降,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后均针刺组相比,δ-OPR拮抗组、非经非穴组的ST段抬高显著升高(P<0.01)。2.心肌细胞平均凋亡率与模型组相比,再灌注前后均针刺组、δ-OPR拮抗组的心肌细胞平均凋亡率显著下降(P<0.01),非经非穴组明显下降(P<0.05);与再灌注前后均针刺组相比,δ-OPR拮抗组、非经非穴组的心肌细胞平均凋亡率显著升高(P<0.01)。3.心肌梗死面积与模型组相比,再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组的心肌梗死面积显著减少(P<0.01),非经非穴组略有减少,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后针刺组相比,δ-OPR拮抗组、非经非穴组的心肌梗死面积显著增加(P<0.01)。4.MIRI大鼠心肌阿片δ受体的表达4.1δ-OPR mRNA:与空白组相比,模型组、非经非穴组、再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、再灌注前后均针刺组的δ-OPR mRNA的表达量显著增加(P<0.01);与模型组相比,再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、再灌注前后均针刺组的δ-OPR mRNA的表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有减少,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后均针刺组相比,再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、非经非穴组的δ-OPR mRNA的表达量显著减少(P<0.01)。4.2δ-OPR蛋白:与空白组相比,模型组、非经非穴组、再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、再灌注前后均针刺组的δ-OPR蛋白的表达量显著增加(P<0.01);与模型组相比,再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、再灌注前后均针刺组的δ-OPR蛋白的表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有增加,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后均针刺组相比,再灌注前针刺组、再灌注后针刺组、非经非穴组的δ-OPR蛋白的表达量显著减少(P<0.01)。5.MIRI大鼠心肌RISK通路相关蛋白的表达5.1 Akt:与空白组相比,模型组、再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组、非经非穴组的Akt表达量显著下降(P<0.01);与模型组相比,再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组的Akt表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有增加,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后针刺组相比,δ-OPR拮抗组、非经非穴组的Akt表达量显著降低(P<0.01)。5.2 Erk1/2:与空白组相比,模型组、再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组、非经非穴组的Erk1/2表达量显著下降(P<0.01);与模型组相比,再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组的Erk1/2表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有降低,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后针刺组相比,δ-OPR拮抗组的Erk1/2表达量明显降低(P<0.05),非经非穴组显著降低(P<0.01)。5.3 JNK:与空白组相比,模型组、再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组、非经非穴组的JNK表达量显著下降(P<0.01);与模型组相比,再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组的JNK表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有增加,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后针刺组相比,δ-OPR拮抗组的JNK表达量明显降低(P<0.05),非经非穴组显著降低(P<0.01)。5.4 p38:与空白组相比,模型组、再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组、非经非穴组的P38表达量显著下降(P<0.01);与模型组相比,再灌注前后针刺组、δ-OPR拮抗组的P38表达量显著增加(P<0.01),非经非穴组略有增加,但差异不明显(P>0.05);与再灌注前后针刺组相比,δ-OPR拮抗组、非经非穴组的P38表达量显著降低(P<0.01)。结论:1.针刺后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤起到了良好的保护作用,表现为可有效地降低大鼠心电图ST段抬高、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积。2.针刺能提高δ-OPR含量和活性,且再灌注前后均进行针刺治疗效果明显好于再灌注前针刺治疗及再灌注后治疗。3.δ-OPR拮抗剂能够明显逆转针刺治疗的效果,提示针刺改善心肌缺血再灌注损伤的效果可能依赖于δ-OPR受体介导信号通路的激活。4.针灸治疗可显著上调δ-OPR的表达,进而增加心肌组织Akt、Erk、JNK和p38的磷酸化水平,激活RISK通路,从而减少心肌缺血再灌注导致的损伤来保护心脏。