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目的: 探索重组人天冬氨酸-β-轻化酶(aspartate-β-hydroxylase, AAH)基因树突状细胞(dendriticcells,DCs)疫苗诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicity Tlymphocytes, CTLs)免疫应答对人肝癌细胞株SMMC-7721的体内外抑制作用及相关机制。 方法: 重组腺病毒体外感染小鼠骨髓源性DCs制备抗原特异性DCs疫苗,分三组:重组腺病毒Ad-AAH-IRES2-EGFP感染DCs组(AAH-DCs组),空腺病毒Ad-IRES2-EGFP感染DCs组(GFP-DCs组)和无病毒感染组(Blank DCs组)。采用Western blot检测DCs疫苗中AAH蛋白的表达。将疫苗分别通过皮下注射方式免疫C57BL/6小鼠,同时设无疫苗注射组(P B S缓冲液代替疫苗),共分为四组:AAH-DCs疫苗诱导组(AAH-DCs-CTLs组)、GFP-DCs疫苗诱导组(GFP-DCs-CTLs组)、空白DCs诱导组(DCs-CTLs组)、无疫苗组(P B S组)。乳酸脱氢酶释放水平评估各组CTLs体外裂解肝癌细胞株SMMC-7721的效应;SMMC-7721皮下注射裸鼠建模后对应分为4组, CTLs处理后观察皮下肿瘤生长情况;第21d处死裸鼠,收集肿瘤组织和脾脏,分别采用real-time PCR和 Western blot检测瘤体组织中Caspase3、Bax和Bcl-2的表达,免疫组化染色法检测裸鼠脾脏组织中CD3+T淋巴细胞的表达。 结果: 成功制备DCs疫苗,AAH-DCs组DCs中可检测到AAH蛋白(?86kD)的表达,而GFP-DCs组和Blank DCs组均无AAH蛋白表达。AAH-DCs-CTLs组的CTLs对SMMC-7721细胞的体外裂解效应明显高于GFP-DCs-CTLs组、DCs-CTLs和PBS组。第21d荷瘤小鼠中AAH-DCs-CTLs组肿瘤平均体积和瘤重最小(P<0.05);real-time PCR和Western blot结果显示与其他组相比,AAH-DCs-CTLs组肿瘤组织中Caspase3、B ax表达水平增高,而Bcl-2降低;免疫组化结果显示AAH-DCs-CTLs组脾脏组织中CD3+T淋巴细胞阳性表达结果显著高于GFP-DCs-CTLs组(P<0.05),而DCs-CTLs及PBS组均呈阴性表达。 结论: AAH-DCs疫苗诱导产生的CTLs能够杀伤表达AAH的肝癌细胞SMMC-7721,并通过促细胞凋亡的机制抑制裸鼠肝癌皮下移植瘤的生长。