Bacillus subtilis FB123所产细菌素的分离纯化及表征

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本文主要是对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)FB123优化培养产生的细菌素进行分离纯化与表征及初步结构的研究。 通过比较5株芽孢杆菌(Bacillus spp.)对养殖水体的净化效果,筛选出一株具有较强水质净化能力的芽孢杆菌FB123,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为Bacillus subtilis FB123。经单、双因素条件优化及7因素3水平的正交试验,确定了B.subtilisFB123产细菌素的最佳培养基和培养条件。 利用硫酸铵沉淀、Sephacryl S-200层析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析从FB123发酵上清液中分离出3种活性组分(细菌素A、B、C)。 细菌素A经SDS-PAGE电泳鉴定为单亚基蛋白,分子量为54kDa,等电点为5.24,过碘酸-Schiff试剂染色法表明该细菌素为一种糖蛋白。细菌素A具有良好的热稳定性,pH活性范围广,且不易被胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶所降解。对多种革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌及真菌都具有良好的抗菌作用。金属离子Fe2+、Zn2+、Al3+、Ca2+对细菌素A的活性具有增效的作用,而Mg2+、K+、Cu2+会部分抑制其抗菌活性。 细菌素B经SDS-PAGE电泳鉴定为单亚基蛋白,分子量为25kDa。过碘酸-Schiff试剂染色法的结果表明该细菌素为一种糖蛋白。 磷钼酸喷雾显色法结果表明细菌素C可能为脂类物质,热稳定性较差,不易被胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶所降解。
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