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目的:以支气管哮喘模型大鼠为研究对象,基于PI3K信号通路探讨丹皮酚对实验性支气管哮喘的防治作用及其作用机制,为丹皮酚的临床应用提供实验依据。方法:60只SD雄性大鼠适应性喂养一周,随机分为正常对照组、哮喘模型组、氨茶碱(27mg/kg)阳性对照组、丹皮酚高剂量组(300mg/kg)、中剂量组(150mg/kg)、低剂量组(75mg/kg),每组10只。除正常组外,每只大鼠用0.2%的OVA凝胶十点致敏,1m L/鼠。其中颈部1点,背部上、中、下3点,两前后足趾4点,两侧腹股沟2点,每点皮下注射0.2%的OVA凝胶,最后腹腔注射0.5m L,建立大鼠支气管哮喘模型。致敏2周,第15天开始,每天灌胃(10m L/kg)给予相应药物(药物均由0.5%CMC-Na配置成混悬液),正常对照组和模型组给予等量的0.5%CMC-Na。同时,在给药0.5h后,除正常组外,连续4周用1%的OVA雾化吸入攻击各组大鼠30min。观察大鼠的一般状况,且每周称重一次。最后一次攻击24h后,用4%的多聚甲醛溶液固定大鼠肺组织,用石蜡包埋后,切片,进行HE染色,用显微镜观察其病理学变化;气管插管,用肺功能仪测定并记录注射Ach5min内每只大鼠气道阻力(AR)和肺顺应性(CL)的变化;支气管肺泡灌洗,计算白细胞的数目;瑞氏-姬姆萨染色对白细胞分类计数;取大鼠肺,称重,计算肺指数;腹主动脉取血,分离血清,ELISA法测定血清中Ig E、IL-4、IL-5、IL-13及IFN-γ的水平;Western blotting法测定各组大鼠PI3K蛋白的表达。结果:1.丹皮酚对支气管哮喘大鼠一般情况的影响卵蛋白致敏、激发后,哮喘模型组大鼠出现毛发干枯倒伏,烦躁不安,呼吸急促,腹部煽动,打喷嚏,点头,抓耳朵,互相撕咬,饮食减少,二便失禁,口唇发绀,舌质紫黯等现象;与模型组相比,正常对照组一般状态均正常,各给药组大鼠一般状态均有所改善,各组大鼠体重变化均无统计学意义。2.丹皮酚对哮喘大鼠肺功能及气道高反应性的影响与正常对照组比较,模型组哮喘大鼠的肺阻力升高显著而肺顺应性降低显著(P<0.01),且随着Ach刺激浓度的逐渐增加,肺阻力不断上升而肺顺应性逐渐下降,丹皮酚低、中、高剂量组均可不同程度降低气道阻力,改善肺顺应性,其中高、中剂量组效果最显著,与哮喘模型组比较,各给药组哮喘大鼠肺阻力显著降低,肺顺应性显著提高,差异具有显著性(P<0.05),其中对抑制肺阻力的增加作用最显著,且乙酰胆碱的刺激浓度和丹皮酚对气道高反应性抑制作用成正相关。3.丹皮酚对哮喘大鼠BALF中白细胞总数及其分类的影响与正常组相比,模型组大鼠肺泡灌洗液中白细胞总数(5.71±0.70)明显增多(P<0.01),经丹皮酚治疗后,白细胞总数明显降低;与模型组相比,各治疗组大鼠肺泡灌洗液中白细胞总数均显著降低,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘模型组BALF中嗜酸性粒细胞(9.4±0.30)、中性粒细胞(24.2±0.40)和淋巴细胞数(55.77±0.35)均明显升高(P<0.01),说明哮喘模型建立成功。与模型组相比,Pae中(5.5±0.40)、高剂量组(6.33±0.45)及氨茶碱组(8.0±0.46)嗜酸性粒细胞数明显减少(P<0.01),说明Pae中、高剂量可明显抑制哮喘炎症嗜酸性粒细胞浸润。4.丹皮酚对哮喘大鼠肺重、肺指数的影响模型组哮喘大鼠肺指数升高明显,与正常对照组相比具有统计学意义(P<0.01);但使用丹皮酚治疗后,肺指数明显降低,Pae高、中剂量组与模型组相比具有统计学差异(P<0.05)。与模型组相比,Pae低剂量组肺指数也降低,但无统计学差异(P>0.05)。说明Pae能显著减轻肺脏肿大,以Pae大剂量(0.53%±0.075%)为佳。5.丹皮酚对哮喘大鼠肺组织形态学的影响HE染色显示,正常对照组气管黏膜上皮完整,肺泡结构正常,支气管壁增厚不明显,镜下未见炎性细胞浸润。模型组支气管壁粘膜下及气管壁周围有大量炎性细胞浸润,支气管管腔狭窄,管壁增厚。与对照组比较,支气管管壁增厚显著,气道平滑肌增生。与模型组比较,丹皮酚高、中、低三个剂量组炎症细胞浸润减少显著,支气管壁及管壁平滑肌均变薄。6.丹皮酚对实验性支气管哮喘大鼠血清Ig E、IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的影响模型组哮喘大鼠血清Ig E(22.50±0.96)、IL-4(116.12±15.01)、IL-5(85.52±6.85)和IL-13(45.03±2.77)的水平相对于正常对照组显著升高(P<0.01),而IFN-γ(89.92±6.16)水平显著降低(P<0.01);给药各组血清Ig E、IL-4、IL-5和IL-13水平相对于模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),而IFN-γ水平显著升高(P<0.05,P<0.01)。7.丹皮酚对实验性支气管哮喘大鼠PI3K蛋白水平的影响模型组大鼠PI3K蛋白表达(2.20±0.05)相对于正常组明显增加(P<0.01),丹皮酚高、中、低剂量组、阳性对照组相对于模型组,PI3K蛋白表达出现不同程度的下降(P<0.01)。结论:丹皮酚对支气管哮喘大鼠作用明显,可使模型大鼠的肺功能得到显著改善,肺组织病理病变得到延缓,减轻炎症细胞的浸润、气管壁的增厚及气管平滑肌的增生,对支气管哮喘具有一定的防治作用,其作用机制可能与影响PI3K信号通路及其PI3K蛋白的表达有关。