背景随着抗菌药物的不断发展与应用,病原菌对常用抗菌药物的耐药性也不断增加,细菌对多种抗菌药物耐药,尤其是对β-内酰胺类药物的耐药已是一个很严重的问题。目的利用多重PCR技术的寡核苷酸芯片建立高通量的检测细菌β-内酰胺类药物耐药基因的方法,为临床合理使用β-内酰胺类抗生素提供科学的依据。方法1、收集、保存、培养细菌样本。2、建立灵敏、特异的细菌DNA提取方法。3、从genbank中收集常见β-内酰胺类药物耐药基因序列信息,并用相应软件分析比对,设计多重PCR引物,建立多重PCR体系。4、针对β-内酰胺类药物耐药基因,设计芯片杂交探针,制作寡核苷酸芯片。5、Cy3标记待测靶序列,片段化PCR扩增产物,与玻片表面的探针固相杂交。结果1、建立了灵敏、可靠的适于PCR扩增的细菌DNA提取方法。2、针对常见β-内酰胺类药物耐药基因,设计了多重PCR引物,建立了包含13对引物的多重PCR体系。3、设计了特异性杂交探针,建立了检测耐药菌常见β-内酰胺类药物耐药基因的寡核苷酸芯片。结论利用多重引物,通过多重PCR,可有效扩增β-内酰胺类药物耐药基因;特异、可靠的适于PCR扩增的细菌DNA提取方法,可有效地提高检测的灵敏度;特异性的杂交探针的杂交,又增强了检测的特异性。本研究初步证实利用寡核苷酸芯片可以实现对β-内酰胺类药物耐药基因的检测。