【摘 要】
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项目来源1.广东省禽类市场环境禽流感病毒污染监测项目2.禽类饲养和贸易链中禽流感病毒污染关键点和传播研究项目。研究目的1.了解2016年9月-2018年8月间广东省活禽市场中不同亚型禽流感病毒的污染和分布情况。2.阐明广东省活禽市场禽流感病毒的主要来源,本文主要探究H3N2亚型禽流感病毒基因重配情况。3.监测禽流感病毒的变异情况,本文主要研究H5N6亚型禽流感病毒血凝素基因变异情况。研究方法1.病
【基金项目】
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国家科技重大专项（2018ZX09739-002,2017ZX10103011-004）；
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项目来源1.广东省禽类市场环境禽流感病毒污染监测项目2.禽类饲养和贸易链中禽流感病毒污染关键点和传播研究项目。研究目的1.了解2016年9月-2018年8月间广东省活禽市场中不同亚型禽流感病毒的污染和分布情况。2.阐明广东省活禽市场禽流感病毒的主要来源,本文主要探究H3N2亚型禽流感病毒基因重配情况。3.监测禽流感病毒的变异情况,本文主要研究H5N6亚型禽流感病毒血凝素基因变异情况。研究方法1.病原学监测。广东省21个地级市流感监测网络实验室以城乡活禽市场为主要监测点,采集环境样本和活禽样本,进行甲型和H5、H7、H9分型检测。对广东省21个地级市监测点的数据进行流行病学的描述性研究,初步掌握禽流感病毒在外环境的污染状况。2.病毒分离鉴定。对禽流感病毒阳性样本进行鸡胚分离培养,再经红细胞凝集试验、核酸提取、PCR扩增、毛细管电泳鉴定后,在PGM平台进行测序和拼接,获得病毒基因序列。3.生物信息学分析。使用 the Ion PGM system 以及 CLC Genomics Workbench v7.51进行数据处理和序列拼接,使用BioEditv7.1.3进行序列编辑、同源性分析等,使用 Muscle3.8.3 1 进行序列比对,使用 iqtree v1.6.3 建立Maximum Likelyhood系统发育进化树,使用FigTree v1.4.2以及Adobe Illustrator CS5对进化树进行编辑和优化。研究结果1.2016年9月-2018年8月间,以广东省21个地级市的活禽市场为主要监测场所,采集环境和活禽样本共计51054份,禽流感病毒检测结果阳性9390例,阳性率为18.39%。2.阳性样本接种鸡胚总数3887个,获得1132株禽流感病毒分离株,分离率29.1%。经测序获得各亚型病毒序列和数量如下:主要为H5N6（73株）、H7N9（77 株）、H9N2（220 株）,以及 H1N3（1 株）、H3N2（7 株）、H3N3（1 株）、H3N6（5株）、H3N8（4 株）、H3N9（1 株）、H5N2（2 株）、H6N2（24 株）、H6N6（54 株）、H9N9（1株）。3.7株H3N2亚型禽流感病毒均为出现了抗原性漂变的重配病毒,其基因节段来源主要为禽源H3N2亚型,H1N2亚型次之。73株H5N6亚型禽流感病毒红细胞凝集抑制试验、血凝素基因系统进化树、及其氨基酸分析的结果均显示,与疫苗株Re-8相比,2017-2018年广东省流行的H5N6病毒出现了抗原性漂移。研究结论2016年9月-2018年8月间,广东省活禽市场中禽流感病毒阳性率高（18.39%）,阳性样本中包含的禽流感病毒亚型多（13种）,其中以H9N2亚型为主。协助构建广东省以活禽市场为来源的禽流感病毒库。证实广东省活禽市场中存在H3N2亚型禽流感病毒,并阐明了其基因重配的情况。2017年7月实施疫苗政策后,H7亚型禽流感病毒阳性率迅速下降,H5亚型禽流感病毒阳性率没有明显变化,2017-2018年广东省流行的H5N6病毒出现了抗原性漂移。以上结果可为广东省的禽流感防控工作提供依据。
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