牛流行热（Bovine ephemeral fever,BEF）是由牛流行热病毒（Bovine ephemeral fever virus,BEFV）感染牛和水牛等引起的一种急性和热性传染病,其主要特征表现为发热,呼吸急促,四肢无力,母牛流产等症状,致使奶牛产奶量大大下降,对养牛业的经济发展产生了很大的影响。尽管疫苗免疫可预防BEF,但是该病仍然时有发生。因此,需要深入研究BEFV复制的分子机制,尤其是宿主基因在BEFV复制过程中的作用及其机制等,以期发现药物靶点,进而为抗BEFV新药研发提供线索和思路。BEFV属于弹状病毒科,暂时热病毒属,是单股负链不分节段的RNA病毒,其基因序列总长1.4 kb,基因组总共包含11个蛋白,其中,5个结构蛋白,分别为N蛋白、P蛋白、M蛋白、G蛋白和L蛋白,6个非结构蛋白分别为α1蛋白、α2蛋白、α3蛋白、β蛋白和γ蛋白。但是到目前为止,BEFV的致病机制及其基因组结构和功能研究均较少。ASC（Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD）是由宿主基因编码的一种促凋亡蛋白,对炎症反应、细胞凋亡和肿瘤的发生具有重要影响。ASC作为炎症小体多蛋白复合体的重要接头分子,在病毒感染过程中发挥重要作用。其中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体是最为广泛研究的炎症小体,能够识别细胞内外的多种病原体和危险损伤信号,使ASC发生斑点化聚集,然后和pro-caspase1以及sensor蛋白组装形成炎症小体并激活胱天蛋白酶1（caspase1）,促进炎性细胞因子IL-1β和IL-18的成熟和分泌。然而,ASC与BEFV的研究尚未有相关文献报道。本研究通过对BEFV感染BHK-21细胞后不同时间点的样品进行荧光定量RT-q PCR和蛋白免疫印迹Western Blot分析,与对照组相比,BEFV感染后NLRP3在m RNA水平和蛋白水平均升高,ASC在m RNA水平表达升高,但在蛋白水平表达降低,同时,ELISA检测病毒感染后上清和细胞中IL-18和IL-1β与对照组相比差异性不显著,表明BEFV通过抑制ASC的表达抑制NLRP3炎症小体的激活。为了检测ASC在BEFV感染过程中的作用,我们构建了ASC慢病毒表达载体并且建立了稳定表达ASC的BHK-21细胞系及空载体转染细胞系;在上述细胞系上分别接种0.1 MOI的BEFV,于24 h和48 h后检测病毒滴度,表明过表达ASC能够显著抑制BEFV的增殖复制。根据ASC基因序列设计并合成靶向抑制ASC的si RNA,转染细胞并接种0.1 MOI的BEFV,结果表明沉默ASC能够促进病毒复制。为了寻找ASC抑制BEFV复制的线索,将病毒α1基因转染过表达ASC基因细胞系后,发现ASC可以抑制BEFVα1基因的表达。为了进一步探究ASC降解α1的机制,我们在转染α1至ASC细胞系6 h后分别加入蛋白酶体抑制剂MG132（10μM）,自噬溶酶体抑制剂CQ（50μM）和caspase广谱抑制剂Z-VAD（10μM）,Western Blot检测发现,在加入Z-VAD后α1蛋白表达发生了部分回调,而MG132和CQ没有作用,表明ASC基因可能通过caspase途径抑制α1蛋白表达。然后分别用caspase1抑制剂Z-YVAD（10μM）和caspase8抑制剂Z-IETD（10μM）处理细胞,结果显示Z-YVAD使α1蛋白表达发生部分回调。上述数据表明ASC通过caspase1抑制了α1的表达。突变caspase1可能识别的α1天冬氨酸位点,转染至稳定表达ASC细胞系中,α1的表达没有变化,即caspase1没有通过识别α1的天冬氨酸突变位点降解α1。因此,ASC通过caspase1抑制α1基因表达的机制还有待于深入研究。本研究率先发现了ASC通过抑制病毒基因α1的表达抑制BEFV的复制,而BEFV感染抑制ASC蛋白的表达,从而抑制了NLRP3炎症小体的组装和激活,拮抗ASC对病毒复制的抑制作用。