Tregs在日本血吸虫感染小鼠DCs抑制过敏性哮喘中作用的实验研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lym50691064
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目的通过过继转移日本血吸虫感染小鼠DCs,探讨蠕虫感染DCs是否通过诱导Tregs产生来抑制过敏性哮喘的发生进展。方法用CD11c+磁珠分离纯化日本血吸虫感染鼠及正常鼠CD1lc+DCs,分别标记为SJDCs和NDCs。部分SJDCs和NDCs用含0.1 mg/mlOVA的完全培养基培养72h,用ELISA试剂盒检测上清液中IL-12和IL-10分泌水平。部分SJDCs和NDCs用于过继转移:将15只BALB/c小鼠,随机分为3组,A组为过继转移SJDCs并诱发过敏性哮喘组,B组为过继转移NDCs并诱发过敏性哮喘组,C组为单纯过敏性哮喘组。A、B两组小鼠经尾静脉过继转移1×106DCs,2小时后A、B、C三组均开始诱发哮喘。4周后,处死小鼠,收集脾脏单个核细胞悬液,用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+Tregs)、CD4+CD25+IL-10+调节性T细胞(IL-10+Tregs)以及CD4+T细胞内细胞因子IL-4、IL-5、IFN-y表达情况;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞计数;取小鼠肺组织作病理切片及免疫组化染色,观察肺组织炎症变化和CCL-11表达。结果SJDCs和NDCs培养上清液中IL-10分泌水平分别为(64.80±3.6050)ng/ml、(43.45±0.7720)ng/ml; IL-12分泌水平分别为(5.88±0.0429)ng/ml、(5.91±0.0330)ng/ml,和NDCs相比,SJDCs IL-10分泌水平显著提高(P<0.001),但两者IL-12分泌水平无显著性差异(P>0.05)。A、B、C三组小鼠Foxp3+Tregs占CD4+T细胞的百分比分别为(8.44±0.3209)%、(4.34±0.6465)%、(3.62±1.2834)%;IL-10+Tregs占CD4+T细胞的百分比分别为(4.86±0.8112)%、(2.80±0.6205)%、(2.30±0.9138)%;IL-4+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为(3.54±0.8444)%、(5.68±0.7328)%、(5.96±1.992)%;IL-5+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为(4.20±0.6745)%、(6.70±0.6285)%、(6.82±1.9955)%;IFN-y+CD4+T细胞占CD4+T细胞的百分比分别为(7.82±0.9550)%、(7.064±2.1733)%、(7.98±3.9392)%,与B、C组比较,A组Foxp3+Tregs、IL-10+Tregs水平显著增高(P<0.01,P<0.001),CD4+T细胞内IL-4、IL-5水平显著降低(P<0.01),三组CD4+T细胞内IFN-y水平无显著性变化(P>0.05)。A、B、C三组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞的总数目(104)分别为6.083±1.4043、26.100±4.7647、35.733±7.3730,A组和B、C组之间比较,A组嗜酸性粒细胞数目显著降低(P<0.05)。A、B、C三组小鼠肺组织免疫组化染色显示,CCL-11在小鼠肺组织中血管、气管内的阳性区域面积占血管、气管总面积的百分比分别为0.2737±0.0218、0.4818±0.0199、0.5339±0.0322;CCL-11在小鼠肺组织中阳性区域平均光密度值分别为0.2546±0.0172、0.3160±0.0235、0.3874±0.0236,与B、C组比较,A组CCL-11在小鼠肺组织中血管、气管内的阳性区域面积占血管、气管总面积的百分比及阳性区域平均光密度值明显下降(P<0.05)。肺组织病理切片显示,与B、C组比,A组肺部炎症明显减轻。结论蠕虫感染DCs能够通过增强Tregs的反应来抑制过敏性哮喘的发生进展。
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