论文部分内容阅读
背景：纤维连接蛋白1(Fibronectin 1, FN1)是一种重要的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)分子,参与了基质重塑及细胞黏附和迁移过程,其通过调节肌动蛋白聚合而影响细胞的运动。2012年的文献报道提示在三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231中FN1为miR-671-3p潜在的靶基因,miR-671-3p具有抑制侵袭和细胞粘附的作用。但目前FN1和miR-671-3p在乳腺癌中的表达报道均存在争议,部分文献提示FN1在乳腺癌组织和细胞中高表达,但也有文献提示其低表达,miR-671-3p在三阴乳腺癌细胞系的研究中提示低表达,而2013年一项大规模的乳腺癌患者血清学样本研究提示其高表达。目的：探讨FN1及miR-671-3p在乳腺癌中的表达、二者的相关性及临床意义。方法：①通过免疫组化SupervisionTM二步法检测81例乳腺癌和其中相应的40例癌旁组织中FN1蛋白的表达,比较FN1与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期、分子亚型表达等临床病理参数及ER/PR、HER2、Ki-67、 p53、p16、Vimentin指标的关系,绘制ROC曲线评价FN1对乳腺癌及乳腺癌的淋巴结转移的诊断价值,收集随访资料,判断FN1对预后的价值；②进行文献分析并运用生物信息学网站microRNA. org、TargetScan、HOCTAR、 miRDB、EMBL-EBI对调节FN1的miRNA进行预测,选定1个miRNA行进一步研究；③RT-qPCR检测上述石蜡组织中49例乳腺癌和13例癌旁组织miR-671-3p的表达,比较其与上述临床病理参数及指标的关系,绘制ROC曲线评价miR-671-3p对乳腺癌及乳腺癌的淋巴结转移的诊断价值,进行生存分析,判断miR-671-3p对预后的影响；④比较FN1与miR-671-3p二者的表达关系。结果：①FN1在乳腺癌细胞和间质中的表达明显高于癌旁腺上皮和间质(均P<0.001),而在癌组织基底膜中的表达则明显低于癌旁(P<0.001)；FN1表达水平与组织学分级(r=0.385,P=0.001)、肿瘤大小(r=0.270,P=0.015)、淋巴结转移(r=0.335,P=0.002)、临床分期(r=0.482,P=0.000)、HER2的表达(r=0.237,P=0.033)呈正相关；与ER/PR(r=-0.309,P=0.005)、p53(r=-0.234,P=0.035)呈负相关；FN1的表达在分子亚型中存在差异(P<0.05),在HER2过表达型中明显高于Lumin al型(P<0.01)；FN1诊断乳腺癌的ROC曲线下面积为0.927,诊断淋巴结转移的ROC曲线下面积为0.631,诊断价值优于Ki-67、p53、p16、Vimentin。乳腺癌3年生存率81%,与肿瘤大小(P=0.048)相关；FN1高表达、ER/PR阴性、HER2过表达、p16阳性和较差的临床分期与乳腺癌3年低生存率存在一定关系,但未达到统计学差异(P=0.071,0.060,0.055,0.079,0.101)。②筛选出miR-671-3p进行进一步研究。③miR-671-3p在癌组织中的表达有低于癌旁的趋势,在三阴型中有低表达的趋势,但未达到统计学差异(P>0.05)；miR-671-3p在余临床病理参数、Ki-67、p53、p16、Vimentin等指标不同亚组中的表达也均无统计学差异(P>0.05)；miR-671-3p诊断乳腺癌的ROC曲线下面积为0.519(P>0.05),诊断乳腺癌淋巴结转移的曲线下面积为0.565(P>0.05),但P>0.05,尚不能认为miR-671-3p对乳腺癌及乳腺癌淋巴结转移的具有诊断价值。miR-671-3p低表达组死亡2例(2/25),生存均值31.444个月,miR-671-3p高表达死亡1例(1/24),生存均值33.818月。miR-671-3p低表达与乳腺癌3年低生存率存在一定关系,但未达到统计学差异(P=0.474)。④FN1与miR-671-3p二者的表达在乳腺癌组织(r=-0.185,P=0.20)及分子亚型三阴型中(r=-0.523,P=0.081)存在负相关的趋势,但未达到统计学差异,尚不能认为FN1与miR-671-3p二者的表达不存在相关性。结论：①FN1的异常表达可能在乳腺癌的发生,淋巴结转移,分子亚型的转移能力和疾病的恶性进展中起重要作用。FN1有望成为判断疾病进展的生物学标记。②miR-671-3p在癌组织中及三阴型中有低表达的趋势,miR-671-3p低表达与乳腺癌3年低生存率可能存在一定关系。FN1与miR-671-3p二者的表达在乳腺癌组织及分子亚型三阴型中存在负相关的趋势。综上所述,乳腺癌中,miR-671-3p作为生物学标记的价值需进一步证实。