背景:肿瘤靶向疗法在近30年内获得了十分快速的发展,然而与此同时,肿瘤分子靶向治疗中存在的耐药问题也日趋显著。溶酶体近年来被报道广泛参与多种分子靶向药物（EGFR抑制剂、VEGFR抑制剂等）的耐药性形成过程。前期研究我们已发现Gefitinib、AZD9291等碱性EGFR TKIs,会造成对自噬溶酶体的功能性阻断和促癌蛋白p62的积累,最终导致肿瘤细胞对Gefitinib、AZD9291等EGFR TKIs产生耐药性,并初步证实了碱性中和改造策略被初步证明是潜在的EGFR TKIs合理改造策略。目的:进一步地将EGFR TKIs的范围扩大到大部分TKIs,分析是否碱性TKIs均会诱导p62的积聚;此外,设计并合成了一类带有强酸性基团的碱性中和类似物,以期进一步降低因EGFR TKIs的分子碱性而导致其促进肿瘤细胞p62积聚,进一步提高EGFR TKIs的抗NSCLC活性。此外,设计并合成新型p62 PROTAC分子,以期为治疗p62异常活化的各类疾病提供有效的候选药物。方法:通过Western blot分析其他碱性TKIs诱导p62积聚的作用、根据共晶结构合理设计并合成TKIs碱性中和类似物、Western blot法分析碱性中和改造策略对碱性TKIs诱导肿瘤细胞中p62积聚的逆转作用;MTS法检测Gefitinib和Osimertinib及其碱性中和类似物的抗NSCLC增殖活性;Western blot法分析Gefitinib和Osimertinib及其碱性中和类似物对EGFR信号通路的抑制活性;生物素标记实验验证p62-Zzi直接结合于p62蛋白;设计并合成一系列p62候选PROTAC分子;通过Western blot分析p62候选PROTAC分子对p62的降解作用。结果:碱性TKIs均会诱导肿瘤细胞p62积聚,通过化学改造,碱性中和类似物可逆转TKIs引起的p62积聚,但激酶抑制活性减弱导致对TKIs的碱性中和改造无法增敏TKIs。已报道的p62-ZZi是潜在的p62结合小分子,可用于p62 PROTAC分子的设计。针对性地设计、合成了数个候选p62 PROTAC小分子,但目前得到的PROTAC分子降解活性并不理想。但本研究的实施,对于开发出p62 PROTAC分子有着重要借鉴意义。结论:虽然我们通过完全碱性中和逆转改造策略的确彻底改变了EGFR TKIs对于溶酶体的抑制以及p62的积聚诱导作用。但碱性中和类似物脂溶性的改变,极大地削弱了类似物进入细胞的能力,从而在增殖抑制活性上出现了巨大的降低。本项研究工作,明确p62-ZZi可作为PROTAC靶蛋白配体部分,并建立了成熟的p62PROTAC候选分子的合成实验体系,为后续PROTAC的合成打下了坚实的基础。