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胶质细胞瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤，临床上虽采取以手术切除为主的综合治疗，但其预后仍很差。恶性肿瘤的根本标志是细胞进行无限制的自主分裂和增殖，这又必须通过细胞周期的演进来完成，因此细胞周期被认为是恶性肿瘤发生的“最后公路”。改变细胞周期调控物的功能，阻断或延缓细胞周期演进而抑制肿瘤细胞的恶性增殖，有可能成为恶性肿瘤基因治疗的突破口之一。 p27是近年发现的CDKI，可通过多种机制对细胞周期发挥强大的抑制作用。在静止细胞内游离的p27含量较高，而在增殖细胞其内含量非常低。在不同增殖状态的细胞内p27mRNA含量无明显差异。p27是一种抑癌物，可抑制细胞增殖，其表达调控主要在转录后水平。虽然在绝大多数肿瘤中未发现p27基因改变，但肿瘤细胞中游离的p27蛋白含量则远低于正常细胞的水平，这与肿瘤的发生、恶性程度以及患者预后密切相关。Cyclin A产生于细胞周期的Gl/S转换阶段，与CDK结合后发挥激酶活性，第四旱巴大学硕士学位论文一 控制着S期的进程。此外，它还促进GZ／M转换，也与恶性肿瘤发生有关。 本实验用PCNA标记指数作为肿瘤细胞增殖活性的参数，研究了人脑胶质 细胞瘤中 P27巾27mRNA和 cyclin A的表达及其与细胞增殖活性的相关性： 第一部分 p27、cyclin A和 PCNA蛋白在人脑胶质细胞瘤中的表达 采用SABC法对正常脑组织和脑胶质细胞瘤标本进行免疫组化染色。 结果发现，在正常脑组织中，p27阳性率和平均标记指数分别为 100％K乃） 和 57．36上 19．4，在胶质细胞瘤中，分别为 64．3％（27／42）和门．55士 8．72。 与正常脑组织相比，昨7在胶质细胞瘤中的表达明显降低（P＜0刀1人此外， 发现随胶质细胞瘤病理分级的增高，p27的阳性率和平均标记指数呈降低 趋势，在各级胶质细胞瘤之间均有显著性差异（P＜0刀 1入研究表明，p27 标记主数与PCNA标记才数呈负相关（＜—0．632，P＜0．0 N，这说明p27表 达量较低的肿瘤细胞具有较高的增殖活性，而表达量较高的肿瘤细胞具有 较低的增殖活性，提示p27在胶质细胞瘤中的表达与肿瘤的恶性程度、细 胞的增殖活性密切相关。p27的低表达或表达缺失是胶质细胞瘤细胞周期 调控紊乱的特征之～，可能参与了胶质细胞瘤的恶性转化。 Cyclin a在正常脑组织中无表达，在胶质细胞瘤中的阳性率和平均标 记指数分别为 62％（26／42）和 4刀5士5．32。随胶质细胞瘤病理分级的增高， cyclin A的平均标记指数呈增高趋势，在各级胶质细胞瘤之间有显著性差异 （P＜0＊ 1）。此外还发现，cyclin A标记主数与 PCNA标记主数呈正相关 h叫．858，P功刀1X说明 cyclin A表达量较低的肿瘤细胞具有较低的增殖 活性，而表达量较高的肿瘤细胞具有较高的增殖活性。提示cyclin A在胶 质细胞瘤中的表达与肿瘤的恶性程度、细胞的增殖活性密切相关。cyclin A 的阳性表达是胶质细胞瘤细胞周期调控紊乱的又一特征，也可能参与了胶 质细胞瘤的恶性转化。 有人证实，在仲外p27可卜断＊dhA ）k囚的转札我们 发现p27与cyclin A标五指数呈负＋［I关（r＝－0．562，p＜0．of），推狈在胶质纫胞瘤形成中， i 3 9［第四罕医大纱硕士学位论文一 cyClin A的阳性表达与 p27不能有效阻断其基因转录有关。提示在胶质细胞 瘤的恶性转化中，p27的低表达或表达缺失与cyclin A可能发挥着协同作 用。 第二部分 p27ffiRNA在各级脑胶质细胞瘤中的表达 应用针对P27mRNA多相寡核昔酸探针，对正常脑组织和胶质细胞瘤 标本进行原位杂交。结果显示，在正常脑组织和胶质细胞瘤标本中均有 P27mRNA的表达。正常脑组织中P27mRNA的阳性率和平均标记指数分别 为 1000（5／5）和 12．ZI土5．02，脑胶质细胞瘤中分别为 88．lO（37／42）和 11．62士5．31，H者之间无显著性差异。在 I、11、Ill、IV级胶质细胞瘤中， p27mRNA的阳性率和平均标记指数之间无显著性差异＊p27mRNA与p27 蛋白的标记指数进行直线相关性检验，发现二者之间无相关性。本部分研 究表明，在胶质细胞瘤中p27基因能够正常转录，p27蛋刨氏表达或表达缺 失的主要原因可能在于该基因转录后调控紊乱。提示对胶质细胞瘤的研究 应侧重于p27基因转录后调控机制。 结论：（）P27在胶质细胞瘤中呈低表达或表达缺失，与肿瘤的恶性程 度、细胞的增殖活性密切相关：p27在高度恶性、高增殖活性的肿瘤中呈低 表达或表达缺失。Q）cyclin A在部分胶质细胞瘤中阳性表达，与肿瘤的恶 性程度、细胞的增殖状态密切相关：cyclin A在低度恶性、低增殖活性的肿 瘤中呈低表达。臼）在胶质细胞瘤的恶性转化中，pZ 7的低表达或表达缺失与cyclin A可能发挥着协同作用。N）在胶质细胞瘤中p27基因均正常转录，P27蛋白低表达或表达缺失的主要原因在于该基?