目的:通过对黄连抗炎作用机理及其与黄柏,附子,干姜作用特点的比较研究,探讨寒热药物的作用特点,为从微观角度认识寒热药性的实质提供依据。方法:(一)通过双荧光素酶报告基因实验检测黄连对STATs,NFκB,E2F转录活性的影响,通过RT-qPCR实验检测黄连对Jurkat细胞和大鼠胸腺STAT4、TNFα、IL-12的mRNA水平的影响。(二)分别通过细胞增殖实验(MTS法),细胞迁移实验,比较黄连、黄柏、附子、干姜对细胞增殖和细胞迁移的影响。分别比较黄连、黄柏、附子、干姜灌胃对大鼠白细胞分类计数,体重,脾脏、胸腺指数的影响。(三)网络药理学部分使用TCMSP数据库查找和筛选黄连、黄柏、附子、干姜药物成分及靶标,在Uniprot数据库中查找靶标蛋白的基因,使用Metascape网站进行基因功能富集分析;使用在线文本挖掘服务器CooLGeN预测黄连炎症靶标,使用Gephi软件构建黄连成分靶标网络。结果:(一)体外实验中,黄连抑制E2F的转录活性,抑制细胞增殖和细胞迁移,上调STAT4和NFκB的转录活性,降低STAT5和STAT6的转录活性,上调STAT4、IL-12、TNFα的mRNA水平,抑制白血病抑制因子引起的STAT4转录活性升高,显示对STAT4的双向调节作用。体内实验中,黄连降低大鼠体重,脾脏指数,胸腺指数,下调外周血淋巴细胞计数,下调大鼠胸腺中STAT4、IL-12和TNFα的mRNA水平。(二)黄连,黄柏下调E2F的转录活性,抑制细胞迁移和增殖,降低大鼠体重,胸腺指数和脾脏指数,下调外周血淋巴细胞计数,白细胞计数;附子和干姜对对E2F和细胞增殖迁移无明显作用,对大鼠脾脏指数有所升高,胸腺指数和体重未表现一致趋势。附子和干姜上调中性粒细胞计数,单核细胞计数和白细胞计数,对淋巴细胞作用不明显。(三)网络药理学方面,共检索到黄连9种化学成分,黄柏26种化学成分,它们共同作用的靶标42个,基因功能富集分析显示,黄连和黄柏主要与胺配体绑定受体,血液循环,对胺离子的反应,离子转运的调节,雌激素信号通路,儿茶酚胺转运,细胞对一氧化氮的反应,细胞对有机环状化合物的反应,金属离子平衡,神经递质的合成,五羟色胺能突触,环核苷酸代谢,IL-4和IL-13信号通路,行为,对温度刺激的反应,对突触传导的负性调节,周期过程,PID AR TF通路,脂肪细胞的脂质分解调节,体液水平的调节等功能相关。附子有7种化学成分,干姜9种化学成分,它们共同作用的靶标22个,基因功能富集分析显示,附子与干姜主要与肌肉收缩的调节,细胞对有机环状化合物的反应,神经活性配体和受体的相互作用,γ-氨基丁酸信号通路,热的产生,化合物的Ⅰ相功能化修饰,唾液分泌,突触后膜电位的调节,蛋白四聚体化,脂质调节等功能相关。黄连抗炎机理的网络药理学研究:黄连化学分子与炎症相关的靶标有15个,其中PTGS2度数最大为8,靶标平均度数为4.3;化学分子的平均度数为8.1。结论:第一,黄连通过抑制E2F转录因子和细胞增殖迁移,以及双向调节STAT4信号通路发挥抗炎作用。第二,寒性药黄连、黄柏抑制细胞增殖和免疫反应,这可能是其发挥抗炎抗肿瘤作用的机制;热性药附子、干姜不能抑制细胞增殖,且促进免疫反应,与寒性药的作用特点和抗炎机理不同。第三,网络药理学的研究表明黄连、黄柏、附子、干姜虽然存在多种相似炎症靶标,但其作用机制不同,黄连和黄柏的靶标功能与附子和干姜的靶标功能各自体现出寒热药性的特点。