丙型肝炎病毒NS2蛋白抑制剂的抗病毒作用机制

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全世界范围内大约有3%的人感染了丙型肝炎病毒(HCV),HCV感染容易发展成为慢性肝炎,肝硬化甚至肝癌。目前针对HCV感染尚无有效的保护性疫苗,并且针对HCV感染的治疗手段仍然有限。临床上常用治疗手段为利巴韦林和聚乙二醇α-干扰素联合使用,但是该疗法无法保证治愈所有类型的HCV患者,而且治疗周期长,副作用比较明显。所以,很有必要研究开发更加安全有效的HCV治疗手段。HCV非结构蛋白2(NS2)在HCV的生活周期中担任非常重要的作用。它参与HCV病毒颗粒的组装和释放,同时能通过影响宿主细胞因子来影响HCV的复制。所以,以NS2作为药物靶标有很大的研究前景。核酸适体作为一种新型的识别分子,具有选择性好、亲和力高,易于修饰、稳定性好等优点。核酸适体与抗体相比,因其亲和力好、分子量小、易合成、易修改、免疫原性低和稳定性好而具有显著优势。研究发现,运用SELEX技术筛选出的核酸适体在开发药物方面具有广阔的前景。在得到针对NS2蛋白的三条特异性核酸适体后,本文着重研究了这些针对NS2的核酸适体对HCV生活周期的影响以及其抗病毒作用机制。本文首先通过真核表达NS2分段蛋白,经过细胞内蛋白竞争实验初步确认核酸适体作用区段。然后,通过筛选适应性突变来进一步确认核酸适体与NS2的相互作用位点。在确认相互作用位点后,再进一步探讨NS2核酸适体的具体抗病毒作用机制。结果表明:核酸适体能特异性结合NS2蛋白。核酸适体不影响细胞的正常生长。核酸适体NS2-3能抑制HCV复制子细胞系和可感染细胞系中HCV的复制,NS2-2核酸适体能抑制HCV病毒颗粒的合成。NS2-2主要通过结合NS2蛋白N端结构域,影响NS2和NS5A的结合来抑制HCV的感染。I861T是确认的主要适应性突变位点。结论:NS2核酸适体主要通过结合NS2蛋白的N端,影响NS2和NS5A的结合来起到抗病毒作用。本文首次发现针对NS2的核酸适体具有抗病毒作用。并且,针对NS2核酸适体的抗病毒作用机制的研究能帮助我们更深入了解HCV病毒本身及其生活周期。所以,这些核酸适体在未来HCV的药物研发和新型联合治疗领域具有巨大的潜力。
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