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目的：探寻经免疫磁珠分选纯化的原代NK细胞体外长期培养、大量增殖的条件；研究HLA半相合的异基因NK细胞对实体瘤乳腺癌细胞株的体外杀伤作用，以及NK细胞表面的NKG2D受体及其相对应的、表达于肿瘤细胞表面的MIC配体的表达水平与该肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性之间的关系。 方法：1．取健康成年人外周血10ml，Ficoll法分离获取单个核细胞，培养于6孔板，贴壁法去除单核细胞。使用德国美天旎公司MACS系统，CD56~+ Microbeads免疫磁珠分选试剂盒提取高纯度NK细胞。2．将EB病毒株B95-8细胞常规培养14天，分别于第7天和第14天收集培养上清。将PBMCs与此含有病毒的上清共培养，并加入环孢素A(CyA)，至三者的终浓度为：PBMCs为1×10~6／ml，EB病毒为20％，CyA为20μg／ml，培养于96孔板，根据细胞生长情况每3-4天换液一次，4周后收获EB病毒转化的B淋巴母细胞样细胞(EBV-LCLs)，作为NK长期培养的饲养细胞。以经照射EBV-LCLs作为饲细胞，在含有IL-15(100u／mL)和中浓度分别为100u／mL和500u／mL IL-2的SCGM(stem cell growth medium)中长期培养NK细胞。3．取瘤细胞或者NK细胞约10~5个，碱裂解法抽提DNA，SSP-PCR方法检测肿瘤细胞HLA-Cw位点和NK细胞KIR位点表达，根据检测结果，分别将二者分为G1组和G2组(G1组的HLA-C位点为HLA-Cw2、4、5、6，KIR位点为2DL2／2DL3和2DS2／2DS3；G2组的HLA-C位点为HLA-Cw1、3、7、8，KIR位点为KIR2DL1／2DS1)。4．MTT法检测HLA-Cw相合与不相合组的NK细胞对实体瘤细胞的杀伤率，以对NK细胞敏感的红白血病细胞株K562作为对照组。5．RT-PCR方法检测NK细胞表达NKG2D水平，了解其在与肿瘤细胞共培养前后表达水平的变化，以及乳腺癌细胞表达MICA水平与NK细胞对乳腺癌细胞的杀伤率的关系。 结果：1．MACS系统分选出的NK细胞，经流式细胞仪检测，CD3~-CD56~+细胞的比例(91.1±7.4)％。使用EBV-LCLs作为饲养细胞，在含IL-2的干细胞培养液(SCGM)中培养NK细胞，比较了培养2周、3周、4周的NK细胞，其杀伤活力与新鲜分离的NK细胞相比并无显著下降；不同浓度IL-2对NK细胞增殖d的影响并无显著的统计学意义。2．KIR／HLA-Cw相合组的NK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于KIR／HLA-Cw不相合组，两组比较差异具有显著性(p＜0.05)。乳腺癌细胞表面