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目的:通过体外实验观察沙利度胺对人肾癌细胞786-0增殖及碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）的表达影响,进一步阐明沙利度胺的抗肿瘤和抗血管生成作用机制,同时观察沙利度胺联合抗癌药物紫杉醇（Paclitaxel）、三氧化二砷（As2O3）对细胞的体外作用。方法:1选取人肾透明细胞癌786-0细胞系进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测沙利度胺不同浓度组（6.25、25、100μg/ml）、不同时间组（24、48、72h）对细胞存活和生长的影响情况。流式细胞仪测定沙利度胺对786-0细胞周期分布和凋亡的影响。2根据MTT的结果,设置对照及实验组,分别提取各组细胞总RNA,鉴定其完整性及含量,通过逆转录-聚合酶链反应（revers transcription PCR,RT-PCR）半定量检测沙利度胺处理前后786-0细胞中bFGF mRNA的表达水平。应用免疫细胞化学（immunocytochemistry,IC）方法定性观察沙利度胺处理前后786-0细胞中bFGF蛋白的表达情况。采用流式细胞术（flow cytometry,FCM）定量检测沙利度胺处理前后786-0细胞中bFGF蛋白表达的变化。3采用MTT比色法检测沙利度胺与抗癌药物紫杉醇、As2O3联合应用后对人肾癌细胞786-0的增殖抑制作用,测定其吸光度（OD）值,并采用isobolanalysis公式分析相互作用指数（Iteraction Index）,评价联合后的作用,如相互作用指数>1为两药拮抗作用;相互作用指数=1为两药相加作用;相互作用指数<1为两药协同作用。结果:1 MTT结果显示:沙利度胺在（6.25～100）μg/ml浓度范围内能明显抑制786-0细胞体外增殖,随着浓度增加抑制率相应升高,以100μg/ml组作用72h抑制率最高。与对照组相比,不同浓度组对786-0细胞抑制率差异均具有显著性统计学意义（P<0.01）。沙利度胺处理细胞48、72h,IC50分别为46.42μg/ml、19.56μg/ml。流式细胞仪检测786-0细胞周期分布和凋亡显示,6.25、25、100μg/ml沙利度胺作用786-0细胞72h,随药物浓度增大, G0/G1期细胞逐渐增多; S期和G2/M期细胞则逐渐减少。即沙利度胺可阻滞786-0细胞周期进程于G1期,该作用呈剂量-效应依赖关系。0、6.25、25、100μg/ml沙利度胺处理细胞72h后,出现典型的亚二倍体凋亡峰,依沙利度胺浓度增大而逐渐升高;凋亡百分率分别为:0.62%、12.43%、21.36%、30.30%,较对照组有显著性统计学意义（P<0.01）。2半定量RT-PCR检测结果显示:沙利度胺不同浓度组处理786-0细胞72h后,bFGF mRNA都有不同程度的降低。25μg/ml沙利度胺浓度组作用72h对786-0细胞bFGF mRNA表达抑制最显著,比较沙利度胺处理前bFGF mRNA表达水平差异具有显著性统计学意义（P<0.01）,免疫细胞化学检测结果显示:对照组786-0细胞中bFGF染色为阳性,细胞的胞浆呈现棕黄色颗粒,颗粒粗大;用药组染色强度明显减弱,颜色变淡,颗粒变细,阳性细胞数减少。流式细胞术检测结果显示:0、6.25、25、100μg/ml沙利度胺处理786-0细胞72h后,786-0细胞中bFGF蛋白表达荧光指数（FI值）分别为2.265、1.859、1.532、2.081,比较处理组和对照组的FI值,差异具有统计学意义（P<0.05）。以25μg/ml对bFGF抑制最显著,与RT-PCR结果一致。3 MTT比色法分析沙利度胺联合紫杉醇、As2O3对786-0细胞的增殖抑制作用,结果显示:沙利度胺可加强紫杉醇对786-0细胞的增殖抑制作用。在6.25～25μg/ml范围内,随沙利度胺浓度的增大,其对紫杉醇的协同作用增强。单用紫杉醇的IC50为1003.60nmol/L,联合6.25μg/ml沙利度胺后可将紫杉醇的IC50降低至367.32nmol/L;联合25μg/ml沙利度胺后可将紫杉醇的IC50降低至6.35nmol/L;因此,在一定浓度范围内,沙利度胺可协同紫杉醇抑制786-0细胞的生长增殖。在6.25～25μg/ml范围内,随沙利度胺浓度的增大,其对As2O3的协同作用增强。单用As2O3的IC50为3.39μmol/L,联合6.25μg/ml沙利度胺后可将As2O3的IC50降低至3.19μmol/L;联合25μg/ml沙利度胺后可将As2O3的IC50降低至1.40μmol/L;因此,沙利度胺可加强As2O3对786-0细胞的增殖抑制作用。4 Isobolanalysis分析相互作用指数显示,沙利度胺联合紫杉醇、As2O3在细胞生长抑制率为50%时的相互作用指数分别为0.52、0.95,证明沙利度胺确实可协同紫杉醇、As2O3对786-0细胞的增殖抑制作用;沙利度胺联合紫杉醇的相互作用指数小于沙利度胺联合As2O3的相互作用指数,说明沙利度胺对紫杉醇的协同作用大于其对As2O3的协同作用。结论: 1本实验证实在一定浓度范围内,沙利度胺能够抑制786-0肾癌细胞增殖,并呈浓度-时间依赖关系。2本实验证实沙利度胺可阻滞肾癌细胞786-0于G1期并可诱导该细胞凋亡,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一。3一定浓度的沙利度胺能够在mRNA和蛋白水平抑制786-0细胞中bFGF表达。通过下调bFGF表达诱导细胞凋亡,逆转耐药性,从而抑制肾癌细胞增殖。4沙利度胺具有抗血管生成与直接抗肿瘤双重作用,低浓度具有较好的抗血管生成作用。5沙利度胺可协同紫杉醇、As2O3对786-0细胞的增殖抑制作用;沙利度胺对紫杉醇的协同抗瘤作用大于其对As2O3的协同抗瘤作用。6本实验证实了沙利度胺具有抗肾癌的作用,并通过沙利度胺联合两种抗肿瘤药物的研究丰富了肾癌的治疗,为肾癌的综合治疗提供了新的选择。