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背景和目的间变性大细胞淋巴瘤（Anaplastic large cell lymphoma,ALCL）是一类CD30阳性的非霍奇金T细胞淋巴瘤,该类肿瘤在临床表现、分子遗传学特征和预后方面具有明显异质性。Zeste增强子同系物2（Enhancer of Zeste Homolog 2,EZH2）是一种表观遗传调节蛋白,可通过其组蛋白甲基转移酶功能催化组蛋白H3第27位赖氨酸发生三甲基化（H3K27me3）。EZH2在多种实体肿瘤和淋巴造血组织肿瘤中过表达,常与肿瘤侵袭性增加、预后不良相关。本课题收集62例系统性间变性大细胞淋巴瘤（S-ALCL）组织病例,通过免疫组织化学方法检测EZH2、MYC、p-STAT3、p-ERK1/2以及H3K27me3蛋白的表达情况,初步探索EZH2在S-ALCL中过表达的机制及其生物学功能。此外,应用EZH2抑制剂和EZH2 sh-RNA慢病毒敲减S-ALCL细胞株,探讨EZH2在S-ALCL中的生物学作用及其靶向治疗的可能性。材料与方法1.实验对象:收集2010年-2018年62例S-ALCL标本,复习所有病例的形态学和免疫表型特征以及收集患者相关临床资料。在体外,选择两个ALCL细胞系Karpas-299细胞株和MAC-1细胞株来验证结果。2.应用免疫组织化学法检测62例S-ALCL（19例ALK阳性ALCL、9例DUSP22重排ALCL、43例双阴性ALCL）中EZH2、H3K27me3的表达情况,进一步行MYC、p-STAT3以及p-ERK1/2免疫组织化学染色,探讨EZH2在S-ALCL中过表达的可能机制。3.构建EZH2 sh-RNA慢病毒载体感染Karpas-299细胞株,并用RT-qPCR和Western blot技术分别检测细胞中EZH2 mRNA和蛋白表达情况以评估敲减效果,CCK-8法检测敲减后细胞增殖水平。4.在S-ALCL细胞系中使用JAK/STAT3信号通路抑制剂（Tofacitinib,Stattic）,应用Western blot检测JAK/STAT3信号通路对EZH2表达及功能的影响。5.在S-ALCL细胞系中使用EZH2抑制剂（DZNep）抑制EZH2表达,随后行Western blot检测细胞中EZH2蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖。6.采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析,两组样本均数的比较采用t检验进行统计学分析,P<0.05为差异有统计学意义。p-STAT3和H3K27me3相关性分析采用Spearman秩相关系数检验进行统计学分析。结果1.免疫组织化学:EZH2在所有S-ALCL病例肿瘤细胞（62/62,100%）中均一致地强阳性。MYC、p-STAT3、p-ERK1/2和H3K27me3在S-ALCL中的阳性率分别为90%（56/62）,63%（39/62）,2%（1/62）,34%（21/62）。在19例ALK阳性ALCL病例中,18例（18/19,95%）MYC阳性,19例（19/19,100%）p-STAT3阳性,1例（1/19,5%）p-ERK1/2阳性,1例（1/19,5%）H3K27me3阳性。在9例DUSP22重排阳性ALCL病例中,7例（7/9,78%）MYC阳性,1例（1/9,11%）p-STAT3阳性,8例（8/9,89%）H3K27me3阳性,p-ERK1/2均为阴性。在34例双阴性ALCL病例中,31例（31/34,91%）MYC阳性,19例（19/34,56%）p-STAT3阳性,12例（12/34,35%）H3K27me3阳性,p-ERK1/2均为阴性。p-STAT3表达与H3K27me3表达呈负相关（P<0.001,Spearman r=-0.652）。2.EZH2敲减后Karpas-299细胞生物学行为变化:慢病毒感染效率80%以上。在EZH2敲减Karpas-299细胞株中,EZH2 shRNA-1组、EZH2 shRNA-2组EZH2 mRNA和蛋白表达水平显著下降,细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.JAK/STAT3信号通路对EZH2表达和功能的影响:Stattic可降低MAC-1细胞株和Karpas-299细胞株p-STAT3表达并使H3K27me3表达增加（P0.05）。Tofacitinib处理的MAC-1细胞株具有相似的结果。Tofacitinib对Karpas-299细胞株p-STAT3、H3K27me3和EZH2表达均无影响。4.DZNep处理后S-ALCL细胞生物学行为变化:应用DZNep 5μM、10μM分别处理MAC-1细胞株和Karpas-299细胞株,EZH2蛋白表达下调,细胞增殖能力降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论1.EZH2在S-ALCL中过表达,其过表达的机制可能与MYC相关。2.EZH2可能促进S-ALCL细胞生长。3.EZH2在不同类型S-ALCL中发挥不同的生物学功能。在ALK阳性ALCL和多数双阴性ALCL中EZH2可能不依赖其经典的组蛋白甲基转移酶活性促进肿瘤发生发展。4.JAK/STAT3信号通路激活可能参与S-ALCL中EZH2的生物学功能调控。5.EZH2可能是S-ALCL潜在治疗靶点。