东亚马氏钳蝎毒BmKαIT1的基因工程——基因合成、克隆、表达、纯化及其性质鉴定

来源 :中国科学院上海有机化学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a5823869
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蝎毒神经肽作为探针是研究电压门控钠离子通道的有效工具.许多蝎神经毒素都和钠离子通道结合并改变钠离子通道的门控方式,因此蝎毒素被用来研究钠离子通道的门控机制,结构和功能关系和与钠离子通道相关的疾病的病理研究.BmKαIT1是从东亚马氏钳蝎中分离的一个蝎毒素,其一级序列和α-型蝎毒素具有高的同源性,并且对昆虫有很强的毒性.该文用单链DNA(ssDNA)法按已知的氨基酸序列合成了编码BmKαIT1的结构基因,命名为rBmKαIT1D30,所谓单链DNA法就是通过分步配对接着一次T4 DNA连接酶连接8个寡核苷酸片段反应的策略,将连接产物直接DNA重组入质粒pTrc99b,后者转化大肠杆菌JM83.酶切筛选得到的正确的克隆子最后经过DNA顺序分析验证.
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