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目的:BCL6是一种在弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)中发现的致癌基因,目前研究已经表明,除了恶性淋巴瘤,该基因还可以作为致癌基因参与乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和胃癌等多种肿瘤的进展和恶性表型的调节。本研究旨在探讨BCL6在胶质瘤中的表达变化以及该分子对胶质瘤细胞恶性表型的影响及相关机制;此外,本研究还探讨了下调BCL6后胶质瘤细胞对TMZ的敏感性变化。方法:1.本研究首先通过qRT-PCR和Western Blot检测BCL6mRNA和蛋白在胶质瘤组织、非瘤脑组织和6种胶质瘤细胞系(U87、A172、SNB19、U251、LN229和LN308)中的表达情况。2.将构建的shBCL6质粒转染至U87和U251细胞中以下调胶质瘤细胞中BCL6的表达,在经Western Blot验证shBCL6质粒的转染效率后,检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移和侵袭等表型的变化。利用CCK-8实验和平板克隆形成实验对肿瘤细胞的增殖活力进行检测;细胞经PI周期工作液或Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒染色后利用流式细胞仪检测BCL6对细胞周期分布和细胞凋亡的影响;通过Transwell和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力改变。3.通过Western Blot实验检测下调BCL6后胶质瘤细胞恶性表型相关蛋白的变化,包括BCL2、Bax、CyclinD1、p21、p53、MMP2和MMP9等蛋白,同时检测了经典癌症相关通路蛋白AKT、ERK以及它们的磷酸化形式p-AKT和p-ERK的表达差异。4.利用CCK-8实验和FACS,对比TMZ协同shBCL6处理细胞和TMZ或shBCL6单独处理细胞对细胞增殖活力和凋亡率的影响,从而评估下调BCL6表达对增敏TMZ对胶质瘤细胞的抑制作用。结果:1.qRT-PCR和Western Blot的结果显示BCL6在胶质瘤组织和细胞系中的表达均高于正常脑组织(P<0.05),在胶质瘤组织中,高级别(WHOⅢ+Ⅳ级)组织BCL6的表达水平显著高于低级别(WHO I+II级)组织(P<0.05)。2.下调BCL6的表达能够抑制胶质瘤细胞的恶性表型。向U87和U251细胞中转染shBCL6敲低BCL6后,细胞增殖活性下降,平板克隆集落形成率降低;细胞周期被阻滞在G0/G1期,G1-S期转换受阻;细胞凋亡率显著升高;细胞的迁移和侵袭能力明显下降。3.根据Western Blot的结果,与胶质瘤细胞恶性表型相关的蛋白表达发生显著变化:BCL2、CyclinD1、MMP2和MMP9等随BCL6的下调而表达减少,Bax和p21随BCL6的下调而表达增加;两种经典的通路蛋白AKT和ERK的磷酸化形式p-AKT和p-ERK随BCL6的下调而表达减少。4.CCK-8实验结果显示,转染shBCL6协同TMZ可使胶质瘤细胞的增殖活性显著降低;FACS结果显示,转染shBCL6协同TMZ可以显著提高细胞凋亡率。结论:BCL6在胶质瘤组织中表达增高,下调其在胶质瘤细胞中的表达可以抑制胶质瘤细胞的恶性表型,提高肿瘤细胞对TMZ的敏感性。下调BCL6表达后磷酸化的AKT和ERK表达减少,表明BCL6可能通过AKT和MAPK通路在胶质瘤细胞中发挥其癌基因作用。