拟南芥F-box家族基因FOA1功能的初步研究

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本文研究的拟南芥基因FOA1属于F-box蛋白家族,通过软件对其起始密码子上游1500bp启动子进行功能预测之后,发现其启动子区域存在大量激素响应元件。但目前对此基因的报道仅限于生物信息学分析结果。本研究主要对拟南芥FOA1与ABA、GA的关系进行了研究,取得了以下主要研究结果:首先通过Gateway克隆技术、农杆菌介导的花序浸染法,获得了2个过量表达FOA1的转基因拟南芥株系FOA1ox1、FOA1ox2。同时从拟美国生物资源中心(ABRC)购买到FOA1T-DNA插入突变体后,通过鉴定后得到FOA1T-DNA插入纯合突变体foa1。用外源ABA、NaCl、GA3、MeJA、IAA、蓝光胁迫处理野生型拟南芥不同时间后,发现FOA1的表达均有变化,说明FOA1的表达同时受ABA、NaCl、GA3、MeJA、IAA、蓝光的调控。同时对FOA1组织特异性分析结果显示FOA1在各个组织中均有表达,而在花和根中表达最高,说明FOA1有可能主要在根和花中起作用。其次通过在不同浓度ABA处理下,统计野生型、FOA1ox1、FOA1ox2、foa1的种子萌发、根伸长、气孔关闭、脯氨酸积累变化,发现foa1相比于其野生型Col-0对ABA更加敏感,而FOA1ox1、FOA1ox2对ABA的敏感性较野生型有所降低。ABA处理条件下,一系列ABA信号转导转录因子在foa1突变体中的转录水平比野生型高,而ABA及胁迫应答基因在foa1突变体中的转录水平则比野生型低。说明FOA1可能在ABA信号转导通路中起负调控作用,并可能通过调节ABA及胁迫应答基因相关转录因子的降解而参与ABA信号转导。最后通过统计在不同浓度GA3或PAC处理下,FOA1ox1、FOA1ox2的萌发、根长、下胚轴变化情况,说明foa1相比于野生型表现出对GA3或PAC高敏感,FOA1ox1、FOA1ox2相比于野生型都表现出对GA3或PAC低敏感。当用PAC、GA同时处理时,FOA1ox1、FOA1ox2对GA3敏感性升高,foa1对GA3的敏感性与野生型差别变小。实时荧光定量PCR方法检测GA合成与代谢途径中部分关键基因在野生型与突变体foa1中的表达,结果显示不管是早期合成基因还是代谢基因的表达量均降低,说明FOA1突变缺失导致突变体foa1中GA合成减少,FOA1有可能正向调控GA合成或信号传导路径。FOA1蛋白具有F-box结构域,因此可能作为SCF复合物的组分,通过影响GA生物合成或信号转导,以及ABA及胁迫应答基因相关转录因子的降解而参与ABA信号转导,这还需要作深入研究。
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