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肿瘤是一种复杂的疾病,通过细胞信号转导途径发生、发展。恶性肿瘤细胞具有扩散、转移、凋亡不受控制的生物学特征。随着生活水不断提高,人类的预期寿命也在逐年延长,恶性肿瘤对人类健康的威胁正在日益加剧,而传统的抗肿瘤药物具有副作用大、治疗窗窄、长期使用易产生耐药性的缺点,研发一种安全有效且有选择性的新型抗肿瘤药物势在必行。1,2-二氢喹啉（EEDQ）及其衍生物,具有广泛的药理活性,除了众所周知的抗疟疾活性外,还包括抗肿瘤和抗炎症活性。本文对一系列EEDQ衍生物进行抗肿瘤活性筛选,最终筛选出化合物EEDQ2对HeLa、HepG2细胞具有最优的杀伤效果。但化合物EEDQ2难溶于水,对于肿瘤细胞没有选择性,直接给药副作用明显。本文设计了一种用于递送化合物EEDQ2的靶向脂质体,以期提高化合物EEDQ2的肿瘤细胞选择性,增加药物摄取,增强肿瘤细胞杀伤效果,降低毒副作用。本文内容:1、EEDQ衍生物抗肿瘤活性筛选及理化性质检测本文选用HeLa、HepG2细胞系筛选8种EEDQ衍生物的抗肿瘤活性,并采用HEK-293T细胞系评价其对正常细胞的毒性。实验结果显示化合物EEDQ2对HeLa、HepG2细胞系的半数致死剂量(IC50)分别为18.55μg/ml、14.53μg/ml,细胞毒性与阳性对照药物紫杉醇相近,同时化合物EEDQ2对正常细胞的杀伤相对较弱,是一种具有应用前景的抗肿瘤化合物。化合物EEDQ2难溶于水,在乙醇中可溶,并且对脂质亲和能力强,所以建立以脂质体为基础的给药体系递送化合物EEDQ2,提高药物的水溶性,增加药物的细胞摄取。2、EEDQ2转铁蛋白脂质体递送系统的建立脂质体是一种具有磷脂双分子层结构的囊泡,把难溶于水的化合物EEDQ2包裹在脂质体双分子层内部,利用这种人工膜与细胞膜的生物相容性,将药物递送到细胞内。与正常细胞相比恶性肿瘤细胞表面的转铁蛋白受体（TfR）高表达,采用转铁蛋白（Tf）修饰的脂质体可以靶向肿瘤细胞。本文以HSPC、Chol、DSPE-PEG作为膜材构建脂质体,HSPC:Chol:DSPE-PEG2000的质量比为36:10:1。制备载药量为10%的EEDQ2脂质体（LP-EEDQ2）,并对脂质体进行表征,粒径为92 nm,电位为-3.12 m V;当脂质体与转铁蛋白孵育后,制备成转铁蛋白修饰的EEDQ2脂质体（Tf-LP-EEDQ2）,电位为-3.36 mV无显著性变化,粒径增大至103 nm。LP-EEDQ2、Tf-LP-EEDQ2表面由PEG包裹使其在血液中具有长循环效果,适宜的粒径可以通过被动靶向作用在肿瘤部位累积。3、Tf-LP-EEDQ2体外评价本文对制得的Tf-LP-EEDQ2载药体系进行体外评价。在细胞毒性实验中,Tf-LP-EEDQ2对HeLa、HepG2细胞显示出更高的生长抑制作用,Tf-LP-EEDQ2与EEDQ2、LP-EEDQ2相比也显示出了最大的细胞毒性;活性氧生成实验中,当HeLa、HepG2细胞被Tf-LP-EEDQ2处理后,细胞的ROS水平明显增强,高水平的活性氧可导致线粒体功能障碍。另外Tf-LP-EEDQ2诱导线粒体膜电位反转,Tf-LP-EEDQ2可能通过改变线粒体膜电位诱导肿瘤细胞凋亡。通过荧光定量分析,Tf-LP-EEDQ2提高了细胞对化合物EEDQ2的摄取,大约是LP-EEDQ2的3.7倍,而后的激光共聚焦和流式细胞术实验初步证明了转铁蛋白修饰的脂质体能够提高肿瘤细胞对药物的摄取。综上所述,转铁蛋白修饰的脂质体递送化合物EEDQ2是一个有潜力的治疗肿瘤策略,Tf-LP-EEDQ2解决了EEDQ2水溶性差,直接给药毒副作用大,生物利用度低等问题,达到靶向肿瘤细胞,延长循环时间的目的,为以后进一步的体内实验奠定了基础。