论文部分内容阅读
启动子在基因的表达调控上具有重要功能,本课题组已经克隆了SsDHN基因并获得了上游启动子序列,根据预测的顺式作用元件构建了启动子不同元件缺失片段的表达载体。本研究以SsDHN启动子部分元件缺失片段为研究对象,将其瞬时转化到盐地碱蓬中及稳定遗传转化到拟南芥中,使用盐以及相应的激素进行喷施处理转化的植株,进行GUS组织化学染色以及实时荧光定量PCR检测验证SsDHN启动子的功能。研究结果如下:1.通过在线分析软件对得到的SsDHN基因起始密码子上游851-bp片段进行生物信息学分析。结果表明,该片段不仅包含启动子所需的特征核心元件TATA-box、CAAT-box,还包含响应激素ABA、SA、MEJA等的顺式作用元件。2.将SsDHN启动子部分元件缺失片段瞬时转化盐地碱蓬中,使用300 mmol·L-1的NaCl,100μmol·L-1的ABA、SA、MEJA喷施处理转化的叶片,并对其进行GUS组织化学染色,以验证SsDHN启动子的功能。结果表明,全长启动子片段DM1受NaCl、ABA、SA、MEJA诱导表达。启动子缺失片段DM2受ABA、SA诱导表达,缺失片段DM3、DM4只受ABA诱导表达。3.通过花序侵染法将SsDHN启动子部分元件缺失片段遗传转化到拟南芥,通过普通PCR检测、Western blot实验对获得的转基因拟南芥进行鉴定,PCR结果显示有目的基因的扩增条带,激光共聚焦显微镜下显示有GFP基因的表达;Western blot结果显示,GFP蛋白成功在转基因拟南芥中表达;这些结果表明外源基因DM1、DM2成功转入拟南芥中,获得了含有DM1、DM2的转基因株系各3个。4.为了进一步验证SsDHN启动子的功能,使用300mmol·L-1的NaCl及100μmol·L-1的ABA、SA、MEJA喷施处理转基因拟南芥,进行GUS组织化学染色及实时荧光定量PCR分析,结果表明转全长启动子片段的DM1拟南芥受NaCl、ABA、SA、MEJA诱导表达,转启动子缺失片段的DM2拟南芥只受ABA、SA诱导表达。