分泌型免疫球蛋白A-ELISA检测试剂盒的研制及临床应用研究

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目的:1.研制酶联免疫试剂盒以检测外分泌液中分泌型免疫球蛋白A含量,并对对分泌型免疫球蛋白A含量ELISA检测试剂盒进行性能验证;2.应用试剂盒对个人生活方式、环境因素和成年人粘膜免疫的关系进行初步研究;3.应用试剂盒对习惯性活动量与sIgA的相关性进行初步研究。方法:1.采用2种不同结合位点的抗体,抗SC抗体用于包被微孔板,另一种用于标记HRP,优化反应条件和筛选试剂,建立双抗体夹心ELISA检测方法,配合底物组装试剂盒;对分泌型免疫球蛋白含量ELISA检测试剂盒进行精密度、准确度、灵敏度、稳定性验证及干扰试验。2.对工作环境相似的30位男性和33位女性,使用标准问卷调查个人的生活方式、口腔卫生、所处环境中空气污染的状况、心理因素、上呼吸道感染的频率及持续时间。通过吐唾沫法采集静息状态下的混合唾液,用于测定唾液体积、唾液分泌率、sIgA浓度、sIgA分泌率。3.对63位成年人、58位大学生和73位小学生通过问卷的方式进行习惯活动量的调查,通过吐唾沫法采集静息状态下的混合唾液,用于测定唾液体积、唾液分泌率、sIgA浓度、sIgA分泌率。结果:1.sIgA标准品的对数和相应吸光度的对数在6.25-600ng/ml范围内呈线性关系;该试剂盒检测限可达4.915 ng/ml,定量限可达6.25ng/ml,灵敏度符合要求;检测低、中、高3个浓度的sIgA样品,实验内的变异系数分别是5.12%、4.60%、5.48%,试验间的变异系数分别是8.39%、6.80%、7.36%;回收试验的回收率为95.93%-105.85%,准确度符合要求;样品基质无明显干扰。2.男性的唾液体积、唾液分泌率和sIgA分泌率高于女性,P值分别为0.023、0.023和0.033;口腔清洁分数≧6组的sIgA分泌率高于分数<6组,P值为0.05;抑郁组URTI发病率及症状持续时间高于正常组,P值分别为0.035和0.016;饮食荤素均衡组的唾液sIgA含量、sIgA分泌率明显高于非均衡组,P值为别0.02和0.0001;多元逐步线性回归显示,sIgA分泌率与唾液体积、sIgA、饮食习惯、休闲运动量和总运动量相关。3.成年组男性唾液体积、唾液分泌率和sIgA分泌率高于女性组,P值分别为0.023、0.023和0.033;男性的工作HPA、运动HPA和总HPA均明显高于女性,P值分别为0.0004、0.0008及0.0001。大学生组男性运动HPA和总HPA高于女性,P值为0.0016和0.0176。小学生组女生sIgA高于男生,P值为0.03。大学生组和小学生组的sIgA含量和sIgA分泌率明显高于成年组;成年组的工作活动量高于另外两组,三个组的体育运动量均有显著差别,小学生组的空闲活动量和总活动量明显高于成年组和大学生组。结论:1.该试剂盒具有较好的精密度、准确度、特异性及稳定性,可用于外分泌液中sIgA含量的测定。2.被动吸烟和室内空气质量对粘膜免疫产生一定程度的影响,中等程度的运动量可以明显地促进粘膜免疫功能,口腔卫生习惯、抑郁焦虑及饮食习惯均会对粘膜免疫状态产生明显影响。
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