异叶梁王茶根化学成分及体外抗炎活性筛选

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异叶梁王茶为Nothopanax davidii为五加科Araliaceae梁王茶属Nothopanax Miq植物,药用部位主要为树皮及根,系民间草药,具有抗风湿、强筋骨等功效,主要用于治疗跌打损伤,风湿关节痛等疾病。目前对其茎皮和叶的化学成分和药理活性进行了研究,从中分离得到多个具有抗炎活性的新三萜皂苷类成分,但其根的研究尚未见文献报道。为了较好地开发利用此植物,本研究对此药材根的化学成分和抗炎活性进行了系统研究。异叶梁王茶根药材粗粉用适量95%及75%乙醇常温浸提,经石油醚(PE)、二氯甲烷(DCM)、醋酸乙酯(Et OAc)、正丁醇(n-Bu OH)依次萃取得不同极性部位,采用重结晶、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及制备、半制备型高效液相色谱等多种现代分离手段对其二氯甲烷部位和醋酸乙酯部位进行系统的分离纯化。采用1D、2D核磁共振波谱(~1H NMR、13C NMR、~1H-~1H COSY、HMQC、HMBC、NOESY)、紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱及圆二色谱等波谱技术以及理化性质对其结构进行鉴定。从中共分离并鉴定得到了18个单体化合物,其中木脂素类化合物7个,三萜及其皂苷类8个,黄烷醇类1个,酚类1个,甾醇类1个,分别为:(7S,8R)-二氢-5′-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1′-苯并呋喃丙醇-9-O-β-D-吡喃木糖苷(1),(7R,8S)-3’,4,7,9’-四羟基-3-甲氧基-8-O-4’-新木脂素-9-O-β-D-吡喃木糖苷(2),(7S,8R)-3’,4,7,9-四羟基-3-甲氧基-8-O-4’-新木脂素-9’-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(3),Lyoniside(4),Nudiposide(5),(+)-Isolariciresinol-9-O-β-D-xylopyranoside(6),(-)-Isolariciresinol-9-O-β-D-xylopyranoside(7),构莓苷F1(8),野蔷薇亭(9),阿江榄仁亭(10),Niga-ichigoside F2(11),蔷薇酸(12),myrianthic acid(13),反式-3-O-对羟基肉桂酰基-乌苏酸(14),2-氧代-坡模醇酸(15),原儿茶酸(16),表儿茶素(17),β-谷甾醇(18),其中化合物1为新化合物,化合物2的立体结构首次得到确证,所有化合物均为首次从该植物中分离得到,1-15,17为首次从梁王茶属植物中分离得到。以一氧化氮合酶(i NOS)为靶蛋白,通过Discovery Studio软件,采用分子对接技术对分离得到的木脂素和三萜及其皂苷类化合物进行了抗炎活性预测,以MTT法测定细胞毒作用,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症模型,Griess法测定细胞培养上清液中NO含量来评价抗炎活性。结果显示:化合物1-7与炎症通路相关蛋白i NOS均具有较高的对接分数,在给药剂量不超过100μM时,对RAW264.7细胞均无显著细胞毒性。与模型组相比,在给药剂量为100μM时,化合物1-4能显著性抑制NO生成,抑制率分别为13.66%(*P<0.05),23.95%(**P<0.01),20.79%(**P<0.01),28.07%(***P<0.001),具有一定抗炎潜力,化合物5-7均没有显著的抑制作用。
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