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猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)，为冠状病毒科冠状病毒属，是一种高度接触性消化道传染病。以幼龄猪水样腹泻、严重脱水及两周龄以下仔猪高死亡率为主要特征，是危害养猪业的一种严重的病毒性传染病。本病于1933年开始在美国流行，现如今已广泛分布于北半球，特别是温寒带地区。TGEV对热敏感，低温可长期保存，液氮条件下存放三年毒力无明显变化。TGEV为单股RNA病毒，由四种主要结构蛋白构成，磷蛋白(N，核蛋白)；膜结合蛋白(M或E1)；糖蛋白(S或E2)；小囊膜蛋白(sM或E)。N蛋白具有高度的保守性并且能够大量表达，因此，N蛋白可以用作血清诊断此病的一个靶蛋白。本实验利用RT-PCR的方法扩增了猪传染性胃肠炎病毒N蛋白的全长基因，并将其克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上，转化至感受态细胞BL21(DE3)中，命名为pGEX-6P-N。酶切鉴定正确后测序，将测序正确的质粒经过IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析结果表明，蛋白在上清成功表达。利用GST标签纯化的方法纯化蛋白上清，SDS-PAGE结果表明，蛋白纯化效果良好，样品保存用作后续研究。将重组蛋白与抗TGEV阳性血清进行westernblot反应，结果表明其具有良好的反应原性。将纯化得到的N蛋白免疫BALB/C小鼠，采用传统的杂交瘤细胞技术，制备了六株能够稳定分泌抗TGEV N蛋白的杂交瘤细胞，分别命名为2G10，3D7，4D12，5A8，5E8，5G7。Western blot与间接免疫荧光(IFA)鉴定结果表明，获得的单克隆抗体均能够与天然TGEV病毒发生特异性反应。将N基因全长截短至三段进行表达，分别命名为N1， N2， N3。分别与获得的六株单克隆抗体进行western blot反应，结果表明，2G10，3D7，4D12，5A8主要作用于N3；5E8，5G7主要作用于N2。根据N蛋白氨基酸序列，合成一系列短肽，建立间接ELISA检测方法，鉴定出两个线性抗原表位：246VTRFYGARSSSA257和189SVEQAVLAALKKLG202。本实验成功制备了抗TGEV N蛋白的单克隆抗体，并且鉴定出两个B细胞抗原表位，与其他文献中预测的抗原表位区域相吻合，这为进一步研究TGEV及其蛋白功能和设计表位疫苗提供依据。