MicroRNA-4284在下肢动脉硬化闭塞症中的表达特点和意义分析

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaosa12
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目的:探讨微小RNA-4284(MicroRNA-4284简称miR-4284)在下肢动脉硬化闭塞症(Arteriosclerosis obliterans,ASO)患者血浆和病变血管中的表达量变化特点;探讨在缺血清缺氧状态下miR-4284在动脉平滑肌细胞增殖、迁移及凋亡中的作用。方法:临床试验:收集西南医科大学第一附属医院血管甲状腺外科2014-2015年间收治的55例下肢ASO患者和54例健康对照者血浆,24例下肢ASO截肢患者的病变血管及24例外伤截肢患者正常血管。选取其中3对年龄及性别相近的下肢ASO患者和正常健康人血浆用microarray筛选出下肢ASO患者血浆与正常健康人血浆中相比较表达差异在2倍以上的24种MicroRNAs(mi RNAs),用实时荧光定量PCR检测临床55例下肢ASO患者和54例健康对照人群血浆中miR-4284的表达量,24例下肢ASO截肢患者病变血管和24例正常血管中miR-4284的表达量;按Fontaine分期将55例下肢ASO患者分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,用RT-qPCR分别检测各期患者血浆中mi R-4284的表达量。细胞实验:正常培养主动脉平滑肌、脐静脉内皮细胞后,再进行缺血清缺氧处理用以模拟临床ASO患者下肢缺血缺氧的状态。用高糖培养基培养脐静脉内皮细胞再进行缺血清缺氧处理,用以模拟临床ASO合并Ⅱ型糖尿病患者。采用RT-qPCR检测各组细胞中mi R-4284的相对表达量;分别上调、下调miR-4284后通过cck8检测细胞增殖、transwell检测细胞迁移,流式检测细胞凋亡,蛋白印迹检测凋亡相关蛋白XIAP、BCL2、BAX的表达。结果:临床试验显示,与健康对照组相比下肢ASO患者血浆中miR-4284的表达量在Fontaine第Ⅰ期中就开始显著升高,并在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血浆中一直持续在高水平状态;下肢ASO患者病变血管与正常血管相比,病变血管中miR-4284的表达量也明显升高;细胞试验:脐静脉内皮细胞在低糖及高糖缺血清缺氧的条件下miR-4284的表达量均升高;主动脉平滑肌细胞在缺血清缺氧的条件下miR-4284表达量降低;主动脉平滑肌细胞在缺血清缺氧的条件下,上调、下调miR-4284,对细胞的增殖、迁移没有太大影响;在不进行缺血清缺氧处理的主动脉平滑肌细胞中,上调、下调miR-4284对细胞凋亡没有太大影响;在缺血清缺氧的主动脉平滑肌细胞中上调miR-4284的表达对细胞的凋亡没有太大影响,但下调miR-4284的表达能抑制主动脉平滑肌细胞凋亡;抑制凋亡相关蛋白XIAP、BCL2在下调mi R-4284后表达量明显升高,促凋亡相关蛋白BAX在下调miR-4284后表达量明显降低,差异有统计学意义。结论:miR-4284在下肢ASO患者血浆和血管组织中表达量明显升高;缺血清缺氧诱导主动脉平滑肌细胞中miR-4284表达明显降低,缺血清缺氧诱导人脐静脉内皮细胞中miR-4284表达明显升高;miR-4284对平滑肌细胞增殖、迁移作用不大;下调miR-4284可以抑制平滑肌细胞凋亡,调控miR-4284有望成为靶向治疗下肢ASO研究的新方向。
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