川楝素是从楝属植物中分离得到的一种杀虫活性物质,以其为主要有效成分研制开发出的植物源杀虫剂,已应用于农业害虫防治。随着川楝素制品在农业生产上的使用和推广,建立高效,快速,灵敏的川楝素检测方法,对进一步开展川楝素的环境安全性,作用机理、质量标准建立等方面的研究有着重要意义。本研究以川楝素为研究对象,开展了川楝素人工抗原的合成及其多克隆抗体的制备研究,并进行了川楝素间接竞争ELISA方法的建立及其确证研究。主要研究结果如下:1.成功合成了川楝素的人工抗原。合成了川楝素的两种半抗原,经HRMS、NMR及IR确证为琥珀酸单酰川楝素(TS)和戊二酸单酰川楝素(TG);采用混合酸酐法(MA)合成了两种免疫原TS-BSA和TG-BSA,采用活化酯法(AE)合成了两种包被原TS-OVA和TG-OVA,并经紫外光谱扫描法和红外光谱扫描法进行了鉴定。2.获得了抗川楝素的特异性多克隆抗体。用两种免疫原TS-BSA和TG-BSA分别免疫新西兰大白兔后,均获得了抗川楝素的特异性抗体。采用间接ELISA法和间接竞争ELISA法对抗体的鉴定结果表明:首次加强免疫后,两种免疫原免疫的兔子体内均已产生了抗川楝素的特异性抗体,并随着加强免疫次数的增多,抗体含量也不断增加,测得两种免疫原TS-BSA和TG-BSA免疫的兔子最高效价分别为:1/64,000和1/320,000。3.建立了川楝素的间接竞争ELISA方法并进行了确证。用筛选出的抗体TS-Ab和TG-Ab,在优化的条件下(10%甲醇的PBS溶液作为待测物的溶解剂,pH 7.4的PBS作为抗体的稀释液,酶标二抗工作浓度为1/4,000,以2.0μg/ml的TG-OVA作为包被原,抗体工作浓度分别为1/9,000和1/60,000),分别建立了川楝素的IC-ELISA检测方法。以(TS-Ab,TG-OVA)组合建立的川楝素IC-ELISA方法,半数抑制浓度(IC50)为1.3266μg/ml,最低检测限(IC10)为0.0363μg/ml,在线性检测范围0.01-50μg/ml内,抑制率的几率值与浓度对数呈线性相关,得线性方程为y=0.8203x+4.8993,r=0.9917;以(TG-Ab,TG-OVA)建立的IC-ELISA方法,川楝素的IC50为3.0323μg/ml,IC10为0.1178μg/ml,在0.1-50μg/ml线性范围内,得线性方程为y=0.9084x+4.5623,r=0.9858;用(TS-Ab,TG-OVA)组合建立的IC-ELISA方法检测自来水中川楝素的添加回收率为82.4%-106.0%,并以HPLC法进行了确证,基本符合残留检测要求,检测甘蓝样品中川楝素的添加回收率为66.0%-79.3%。