溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)与克罗恩病(Crohn’s Disease,CD)共称炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD),是一种病因不明的肠道慢性炎症性疾病。我国近年UC呈高发趋势,最近10年报告的病例数目是10年前的3.8倍。然而,由于UC发病机制不明,目前尚无有效的预防复发方法,所以该病已被世界卫生组织列为现代难治性疾病之一。因此,研究UC发生机制并探索有效防治措施已成为该领域关注的焦点。自噬(Autophage)是一个散装降解系统,胞浆成分被双层膜囊泡包裹进而有针对性与溶酶体融合降解,是细胞内的再循环系统。细胞自噬在饥饿或各种压力状态下,胞质中可溶性蛋白和部分细胞器被降解成氨基酸等用于供能和生物合成,这是真核细胞在长期进化过程中形成的一种自我保护机制。另外,细胞自噬具有持家功能,清除变性或错误折叠的蛋白质、衰老或损伤的细胞器等,这有利于细胞内稳态的维持。近年来许多研究表明,细胞自噬与个体发育、氧化性损伤保护、神经退行性疾病、肿瘤增殖及免疫炎症性疾病有关。细胞内的病原体被自噬溶酶体降解,是公认的抗菌防御机制。到目前为止,已经确定了200多个UC的易感位点。一些基因位点,是UC独特的,而有些基因位点是与其他疾病共享的,这充分表明了UC病理生理的复杂性。以前的研究发现,自噬的一个组成部分Atg5在巨噬细胞和树突状细胞固有免疫反应中的重要性,研究显示Atg5在活动性肺结核和肺部炎症中起着保护性作用。而对自噬基因ATG16L1的研究甚少。最近研究表明,自噬基因ATG16L1遗传变异性与UC密切相关,成为UC发病机制的研究重点。体外研究实验表明,CD相关ATG16L1的T300A单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)是一个功能丧失的SNP,通过增加半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)介导的对ATG16L1蛋白的裂解,从而影响自噬的功能。另外,Lassen等把人ATG16L1T300A基因敲入到小鼠体内,更好地阐明了ATG16L1T300A的作用。结果显示,与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,ATG16L1的T300A基因敲入小鼠的潘氏细胞和杯状细胞的形态异常和功能缺陷,抗菌肽的分泌减少和IL-1b的分泌增加,表现为恶化的鼠伤寒沙门氏杆菌感染的盲肠炎症。另一组研究结果也表明了,在人ATG16L1T300A和小鼠ATG16L1T316A(相当于人的T300A)原代巨噬细胞中,与WT巨噬细胞相比,自噬功能减低和炎症因子IL-1b的分泌量明显增加。为了更好地了解自噬的细胞特异性作用,Conway等建立了ATG16L1条件性敲除小鼠(肠上皮细胞或CD11C+树突状细胞特异性敲除ATG16L1)。与野生型小鼠相比,上皮细胞Atg16L1缺陷的小鼠表现出潘氏细胞的异常,更易感染鼠伤寒鼠伤寒沙门氏杆菌的感染。而CD11C+树突状细胞Atg16L1缺陷的小鼠表型与WT小鼠的表型相似。这些结果说明,肠上皮细胞的ATG16L1在维持肠道稳态方面发挥着至关重要的作用,但CD11C+树突状细胞的ATG16L1的作用可能是可有可无的。因此,本研究的目的是阐明ATG16L1在树突状细胞中,特别是在实验性结肠炎小鼠树突状细胞中的作用。所以,在本研究中,独立的产生了树突状细胞特异性Atg16L1敲除的小鼠,建立了两种急性结肠炎(鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性结肠炎模型和3%DSS急性结肠炎模型)和一种慢性结肠炎模型(2.5%DSS慢性结肠炎模型),采用细胞流式术、免疫荧光染色、透射电镜、Western blot方法、间接酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的检测、细菌吞噬试验、庆大霉素保护试验及real-time Q-PCR等技术检测Atg16L1敲除的小鼠原代树突状细胞的功能,以此来表明树突状细胞的自噬作用在维持肠道内环境稳定的功能,为研究其与本病发生、发展的关系,为探讨UC的发病机制提供理论依据。具体实验分为以下三部分:第一部分:ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠的成功建立目的:确定ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠的成功建立。方法:1)ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠的建立是与gen Oway公司合作完成的。根据实验设计原则,ATG16L1基因的外显子3被选中敲除;在ATG16L1基因的外显子3两侧各放一个Lox P序列和新霉素序列,新霉素阳性的细胞即为选择的特异性树突状细胞;将带有新霉素序列的小鼠后代再与带有Flp序列的小鼠交配,将新霉素序列切除掉,即得到ATG16L1f/f小鼠;ATG16L1f/f小鼠与带有Cre的小鼠交配,后代通过PCR检测flox与Cre基因即可得到ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠。2)应用Q-PCR技术分别检测了ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠的ATG16L1基因。结果:1)应用Cre/Lox P技术成功建立了ATG16L1f/f小鼠和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠。2)Q-PCR实验结果表明在ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠中无ATG16L1基因的表达。第二部分:树突状细胞特异性ATG16L1敲除在急、慢性实验性结肠炎小鼠肠黏膜炎症的调节作用目的:探讨ATG16L1对急、慢性期实验性结肠炎小鼠肠黏膜炎症的影响及其调节机制。方法:1)以灌胃法(3x10^6 cfu/小鼠)建立鼠伤寒沙门氏杆菌模型:10只雌性ATG16L1f/f和10只ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠分别于感染前一天,给予小鼠禁食水4小时后行链霉素20 mg/小鼠灌胃,以清除小鼠肠道的细菌,感染当天以3x10^6 cfu鼠伤寒沙门氏杆菌/小鼠灌胃,分别于感染后第1、3、5天行DAI评分,并于感染后第5天处死小鼠。2)通过饮用3%右旋葡聚糖硫酸钠(Dextran sodium sulfate,DSS)7天成功建立急性实验性结肠炎模型,雌性ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠各10只;分别于实验的第2、4、6天行DAI评分,并于第7天处死小鼠。3)通过饮用2.5%DSS 28天成功建立慢性实验性结肠炎模型:在第1~5天、8~12天、15~19天和22~26天的时间段内饮用4个循环2.5%的DSS,第27、28天及其它时间饮用蒸馏水。雌性ATG16L1f/f和ATG16L1f/f CD11c-Cre小鼠各10只;于每个循环的第1、3、5天行DAI评分,第29天处死动物。4)肠黏膜炎症改变的评估包括每天体重(Body weight,BW)改变、疾病活动指数(Disease activity index,DAI)、结肠长度,以及结肠形态学改变和病理评分;5)应用间接酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(7)Tumor Necrosis Factor-a(11)TNF-a(8)、白介素-1b(Interleukin-1beta,IL-1b(8)和IL-6的表达水平。6)应用细胞流式术(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)来检测CD4+T细胞的活化标志物CD44和CD69的表达水平。7)检测各模型小鼠粪便中Ig A+细菌的比例和粪便中Ig A的总量。8)细菌移位的测定:应用涂菌法分别测定各种模型中粪便、回肠、结肠组织及MLN中的细菌数目。结果:1)鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性实验性结肠炎模型:ATG16L1f/f小鼠和Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重逐渐下降,至感染后的第5天,ATG16L1f/f小鼠的体重下降至原始体重的95%,而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重下降至原始体重的86%。ATG16L1f/f小鼠的DAI评分为(6.3±0.41),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的DAI评分为(6.9±1.21,P>0.05);Atg16L1f/f小鼠结肠大体评分(1.85±0.15)及结肠病理可见大量炎症细胞浸润。而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的结肠大体评分有所增加(2.13±0.14,P>0.05),结肠病理可见黏膜缺损,腺体破坏或消失,杯状细胞减少,可见黏膜、黏膜下层甚至肌层大量的炎性细胞浸润,隐窝增生,并有隐窝炎症及隐窝脓肿形成。与ATG16L1f/f小鼠比较,Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠结肠的病理评分有所增加,但无统计学意义(5.88±0.03vs5.50±0.72,P>0.05)。2)3%DSS急性实验性结肠炎模型:给予3%DSS饮用水后,Atg16L1f/f小鼠和Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重逐渐下降,但是Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重下降较为明显。Atg16L1f/f小鼠的DAI评分为(6.25±0.75),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的DAI评分为(8.6±0.41,P<0.01)。ATG16L1f/f小鼠的结肠大体评分为(1.67±0.21)及结肠长度为(5.57cm±0.35 cm),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的结肠大体评分为(2.0±0)、结肠长度为(5.3cm±0.33cm),两组间无统计学差异;结肠病理可见黏膜缺损,腺体破坏或消失,杯状细胞减少,可见黏膜、黏膜下层甚至肌层大量淋巴细胞浸润。与Atg16L1f/f小鼠比较,Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠病理评分明显增高(10.67±1.17vs5.25±0.25,P<0.01)。3)2.5%DSS慢性实验性结肠炎模型:实验期间,给予2.5%DSS饮用水后,ATG16L1f/f小鼠和Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重出现下降,至实验的第14天体重下降至最低。之后,Atg16L1f/f小鼠的体重逐渐回升,至实验结束回升至小鼠基础体重的96%,而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的体重则回升为基础体重的90%。在第29天ATG16L1f/f小鼠DAI评分降为(4.17±0.48),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的DAI为(7.33±0.33,P<0.001)。与Atg16L1f/f小鼠相比,Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠结肠的大体评分(2.80±0.2vs1.60±0.20,P<0.001)及病理评分明显增加(10.37±1.00vs7.08±0.88,P<0.01),结肠长度没有变化(6.00cm±0.20 cm vs6.50cm±0.30 cm,P>0.05),结肠病理可见黏膜缺损,腺体破坏或消失,杯状细胞减少,可见黏膜、黏膜下层甚至肌层大量淋巴细胞浸润。4)ELISA实验结果表明:a.鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,肠黏膜固有层单个核细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(24.26 pg/m L±6.57 pg/m L,248.22 pg/m L±16.88 pg/m L,619.72 pg/m L±149.89 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(51.54 pg/m L±5.22 pg/m L,290.44 pg/m L±48.88 pg/m L,922.55 pg/m L±147.70 pg/m L,P>0.05);在Atg16L1f/f小鼠中,肠系膜淋巴结单个核细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(13.63 pg/m L±1.85 pg/m L,244.58 pg/m L±27.30 pg/m L,320.90 pg/m L±233.68 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(19.42 pg/m L±2.29 pg/m L,429.02 pg/m L±133.91pg/m L,497.40 pg/m L±129.90 pg/m L,P>0.05)。b.3%DSS急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,肠黏膜固有层单个核细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(22.19 pg/m L±2.12 pg/m L,273.06 pg/m L±15.46 pg/m L,1153.9 pg/m L±102.84 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(72.89pg/m L±5.19 pg/m L,363.93 pg/m L±14.80 pg/m L,1783.53 pg/m L±268.42pg/m L,P<0.05);在Atg16L1f/f小鼠中,肠系膜淋巴结单个核细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(0.78 pg/m L±0.28 pg/m L,229.24 pg/m L±50.82 pg/m L,728.00 pg/m L±64.10 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(2.48 pg/m L±0.134 pg/m L,1126.60 pg/m L±19.07 pg/m L,1307.92 pg/m L±74.74pg/m L,P<0.05)。c.2.5%DSS慢性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,肠黏膜固有层单个核细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(24.76 pg/m L±2.03 pg/m L,137.75 pg/m L±15.08 pg/m L,1601.06 pg/m L±202.12 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(59.58 pg/m L±7.41 pg/m L,441.40pg/m L±19.43 pg/m L,2942.92 pg/m L±438.95 pg/m L,P<0.05);在Atg16L1f/f小鼠中,细胞上清液中炎症因子IL-1b、TNF-α和IL-6分泌水平分别为(6.61 pg/m L±1.60 pg/m L,229.02 pg/m L±29.22 pg/m L,403.54 pg/m L±122.88 pg/m L),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,其炎症因子的分泌水平明显升高,分别为(19.46 pg/m L±3.34 pg/m L,324.14 pg/m L±41.41 pg/m L,1017.62 pg/m L±90.92 pg/m L),两组间炎症因子分泌的差异有统计学意义(P<0.05)。5)提取MLN单个核细胞,应用细胞流式术检测CD4细胞活化标准物CD44和CD69,实验结果表明:a.鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比为(12.2%±1.2%,12.9%±2.4%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比为(10.3%±1.2%,12.75%±2.3%),两组小鼠间的差异没有统计学意义(P>0.05);b.3%DSS急性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比为(11.7%±1.2%,9.28%±2.1%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比为(9.75%±2.1%,8.42%±1.5%),两组小鼠间的差异没有统计学意义(P>0.05);c.2.5%DSS慢性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比为(24.3%±1.1%,9.8%±0.9%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中,晚期活化的CD44+CD4+T细胞百分比和早期活化的CD69+CD4+T细胞百分比(22.7%±2.2%,7.84%±1.0%),两组小鼠间的差异没有统计学意义(P>0.05);6)Ig A+细菌的检测结果:a.鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,Ig A+细菌的比例为(11.53%±2.42%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的Ig A+细菌的比例为(44.00%±9.51%),两组间Ig A+细菌的比例差异有统计学意义(P<0.01)。b.3%DSS急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,Ig A+细菌的比例为(12.98%±0.62%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中Ig A+细菌的比例上升,为(19.43%±0.77%),两组间Ig A+细菌的比例差异有统计学意义(P<0.05)。c.2.5%DSS慢性实验性模型:在给予DSS饮用水之前,收集小鼠的粪便,进行Ig A染色。在Atg16L1f/f小鼠中,Ig A+细菌的比例为(2.98%±0.65%),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中Ig A+细菌的比例明显上升,为(5.84%±0.87%),两组间Ig A+细菌的比例差异有统计学意义(P<0.05);在实验进行到第2周,与Atg16L1f/f小鼠相比,Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中Ig A+细菌的比例上升,Ig A+细菌的比例为(19.43%±2.77%vs15.68%±1.60%,P<0.01);到实验结束时,与Atg16L1f/f小鼠相比,Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠中Ig A+细菌的比例上升(32.88%±3.20%vs28.65%±4.18%,P<0.05)。7)鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中Ig A总量为(1100μg/g±24.2μg/g),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便中Ig A总量为(2850μg/g±33μg/g),两组间Ig A总量的差异有统计学意义(P<0.05);3%DSS急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中Ig A总量为(70μg/g±5.6μg/g),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便中Ig A总量为(81μg/g±9.2μg/g),两组间Ig A总量的差异没有统计学意义(P>0.05);2.5%DSS慢性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中Ig A总量为(48μg/g±3.2μg/g),而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便中Ig A总量为(50μg/g±8.3μg/g),两组间Ig A总量的差异没有统计学意义(P>0.05)。8)鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中细菌的数量为(1674x10^6 cfu/g±169 x10^6 cfu/g),回肠组织中的细菌数量为(201.50 x10^3cfu/g±137 x10^3 cfu/g),结肠组织中的细菌数量为(170.80x10^3 cfu/g±33 x10^3 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(198 cfu/g±28.20cfu/g);而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便细菌的数量为(2584 x10^6 cfu/g±590x10^6 cfu/g),回肠组织中的细菌数量为(529.3 x10^3 cfu/g±354.6 x10^3cfu/g),结肠组织中的细菌数量为(246.9x10^3 cfu/g±91 x10^3 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(369 cfu/g±112 cfu/g),两组间粪便中、回肠、结肠组织及肠系膜淋巴结中细菌的数量差异均没有统计学意义(P>0.05);3%DSS急性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中细菌的数量为(2.20 x10^6 cfu/g±0.50x10^6 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(20 cfu/g±2.00 cfu/g);而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便细菌的数量为(10.7x10^6 cfu/g±1.71x10^6 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(36cfu/g±1.10 cfu/g),两组间粪便及肠系膜淋巴结中细菌的数量差异有统计学意义(P<0.05);2.5%DSS慢性实验性结肠炎模型:在Atg16L1f/f小鼠中,粪便中细菌的数量为(27.33 x10^6 cfu/g±1.23 x10^6 cfu/g),回肠组织中的细菌数量为(37 x10^3 cfu/g±1.37 x10^3 cfu/g),结肠组织中的细菌数量为(36x10^3 cfu/g±3.30 x10^3 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(18cfu/g±2.80 cfu/g);而Atg16L1f/f CD11c-Cre小鼠的粪便细菌的数量为(435.51x10^6 cfu/g±43.9 x10^6 cfu/g),回肠组织中的细菌数量为(89 x10^3cfu/g±3.54 x10^3 cfu/g),结肠组织中的细菌数量为(246 x10^3 cfu/g±71x10^3 cfu/g),肠系膜淋巴结中的细菌数量为(76 cfu/g±8.4 cfu/g),两组间粪便中、回肠、结肠组织级肠系膜淋巴结中细菌的数量差异均有统计学意义(P<0.05)(Fig.2-7C)。第三部分:树突状细胞特异性ATG16L1敲除对小鼠骨髓来源的树突状细胞功能的影响目的:研究ATG16L1对小鼠骨髓来源的树突状细胞的调节作用。方法:分别应用饥饿培养基(EBSS)及鼠伤寒沙门氏杆菌(salmonella)感染这2种刺激条件诱导自噬的发生,将实验分为4组:control组;salmonella组;starvation(EBSS)组;starvation+salmonella组。1)采用western blot技术检测骨髓来源的树突状细胞中LC3I、LC3II和P40的表达水平。2)通过自噬功能检测实验包括活性氧(Reactive oxygen species,ROS)的检测、细菌吞噬试验和庆大霉素保护试验来检测树突状细胞处理细菌的功能。3)通过透射电镜来检测细胞中自噬小体和吞噬小体的形成情况以及线粒体的数量。4)采用免疫荧光染色法来检测鼠伤寒沙门氏杆菌的定位情况。5)采用抗原呈提实验来检测树突状细胞的抗原处理和呈提能力的变化。结果:1)western blot技术实验结果表明:在ATG16L1f/f树突状细胞中,LC3I完全转换为LC3II,尤其在鼠伤寒沙门氏杆菌感染和饥饿状态的双重诱导后,LC3II的转换上升至最高。而树突状细胞特异性敲除ATG16L1后,在各种刺激因素诱导自噬的条件下,Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞没有LC3II的表达。2)自噬功能检测实验表明:在正常培养基条件下,加入鼠伤寒沙门氏杆菌后,与Atg16L1f/f树突状细胞相比,Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞在加入鼠伤寒沙门氏杆菌1h之内产生的ROS明显较多,细胞清除细胞内细菌的能力明显降低(感染后1h和4h),但是两种细胞吞噬细菌的能力在感染后15 min、30 min和60 min后均没有差异;应用饥饿培养基的实验结果与正常培养基的实验结果相一致。3)透射电镜结果显示:每个Atg16L1f/f树突状细胞中自噬小体的数量明显较Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞的数量增多,而吞噬小体的数量明显减少,两组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。而且与Atg16L1f/f树突状细胞相比,Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞中的线粒体的数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。4)免疫荧光检测结果显示:Atg16L1f/f树突状细胞中鼠伤寒沙门氏杆菌与beclin-1的共定位与Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞中的共定位数量没有差别。在Atg16L1f/f树突状细胞中,ATG16L1与LC3的共定位数量高达40%,而在Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞中,没有ATG16L1的表达。与Atg16L1f/f CD11c-Cre树突状细胞相比,Atg16L1f/f树突状细胞中鼠伤寒沙门氏杆菌与Lamp1的共定位数量较多,鼠伤寒沙门氏杆菌与rab5、rab7的共定位数量明显减少(P<0.05);应用饥饿培养基的实验结果与正常培养基的实验结果相一致。5)抗原呈提实验结果表明:给予Ova-peptide刺激后,Atg16L1f/f树突状细胞的抗原呈递能力和Atg16L1f/f DC-Cre树突状细胞的抗原呈递能力的差异无统计学意义,即幼稚CD4+T cells的增值百分比分别为(92.6%±4.6%vs91.4%±5.3%,P>0.05),而给予Ova-protein刺激后,与Atg16L1f/f树突状细胞相比,Atg16L1f/f DC-Cre树突状细胞的抗原呈递能力下降(81.7%±2.6%vs65.8%±1.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1在成功建立急、慢性期实验性结肠炎小鼠模型基础上,证实树突状细胞特异性敲除ATG16L1基因可明显加重DSS诱导的小鼠肠黏膜炎症,而对鼠伤寒沙门氏杆菌感染的急性实验性结肠炎模型无影响;2树突状细胞特异性敲除ATG16L1基因通过上调肠系膜淋巴结和肠黏膜固有层中单个核细胞中IL-1?、TNF-α和IL-6的分泌水平,加重DSS诱导的小鼠肠黏膜炎症;3树突状细胞特异性敲除ATG16L1基因可抑制自噬小体的形成,增加ROS的生成,抑制胞内鼠伤寒沙门氏杆菌的清除,证实敲除ATG16L1基因可抑制骨髓衍生的树突状细胞的自噬功能;4 ATG16L1维持细胞的抗原处理能力。