单增李斯特菌是重要的食源性人兽共患病病原,是食物感染病原中致死率最高的一种,平均可达30%,在食品安全上具有重要意义。随着经济的发展,人们的食物样品来源多样。单增李斯特菌对环境适应能力强,可在4℃缓慢生长,所形成的生物膜有利于其产生持久性污染。人类一旦感染发病后,易出现败血症、脑膜炎、流产等临床症状,严重影响人类身体健康,同时相关食品召回和环境消杀也造成了一定的经济损失。由于食品动物在生产、屠宰、销售等环节均有受污染的可能,这为单增李斯特菌的定植、生长及传播提供了便利条件。目前针对食品中单增李斯特菌的检测方法以细菌培养、生化反应、血清学分型为主,不利于大批量的样品检测,同时也费时费力。随着分子生物学的快速发展,以PCR为核心的核酸扩增技术逐渐应用广泛,可以快速进行多批量样品检测,大大缩短了检测时间,相对准确率更高,但仍然存在假阳性等不确定性因素,干扰检测的准确性。因此,食品安全实践中需要更加准确快速检测方法来克服这些不足。本课题针对动物源性食品链中单增李斯特菌进行检测,以核酸扩增技术为核心,通过建立一系列核酸检测方法,以期建立一种比现有的快速检测方法更加精确稳定的检测方法。以最佳的检测体系,对模拟食物样品中单增李斯特菌进行检测,验证方法的可行性。对实际样品生产、屠宰和销售环节中的单增李斯特菌的分布情况进行分析,在获得食源性李斯特菌流行病学背景情况下,通过国标对比验证方法的可行性。建立了单增李斯特菌荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q PCR）的定量检测方法。以单增李斯特菌iap基因为检测靶标,构建重组质粒,绘制标准曲线。对q PCR的反应条件和反应体系进行优化,同时进行方法灵敏度与特异性分析。结果显示,所绘制的标准曲线的CT值与质粒模板的对数值线性关系良好,灵敏度可达到4.68×10~2copies/μL。并选择加标牛奶和加标牛肉样品进行模拟分析,灵敏度分别可以达到5.34×10~1 CFU/m L和5.34×10~2CFU/g。在前增菌的情况下,对养殖、屠宰和销售等环节收集的生牛乳、粪便、生牛肉、屠宰刀具、案板、冷冻鱼肉和冷冻猪肉等实际样品的总检出率为10.23%（9/88）。该方法适用于快速批量检测单增李斯特菌,具有高效准确、定量分析的特点。针对单增李斯特菌现场或基层单位检测限制,随后我们又建立了基于重组酶聚合酶等温扩增（Recombinase Polymerase Amplification,RPA）的单增李斯特菌检测方法,针对反应条件与反应体系进行优化,同时对方法的灵敏度、特异性和重复性进行分析,灵敏度可达到1.5 ng/μL,1 h内可以完成从扩增到结果观察整个过程。针对加标样品和实际样品的检测的灵敏度虽然较q PCR检测方法灵敏度稍低,但其检测时间较q PCR检测时间短、操作便捷,反应场所不局限在实验室中,对现场检测更具有意义。鉴于PCR方法易出现假阳性,现有方法敏感性不能满足食品安全检测需要的情况,在建立了前两种快速检测方法的基础上,吸收最新CRISPR精确基因编辑的优点,在实验中建立了基于CRISPR/Cas13a的单增李斯特菌的核酸检测方法,与RPA等温扩增和荧光探针结合。先后成功表达纯化出Cas13a蛋白,针对单增李斯特菌靶点设计并纯化出cr RNA,与靶点结合后验证了Cas13a蛋白具有检测活性。进而建立SHERLOCK-LM检测方法,在50μL体系中通过一次加样即可在5min得到可视化检测结果,方法具有快速、可定量、敏感度高等特点,灵敏度可以达到1.5×10-3 ng/μL。同时针对加标富集样品和加标未富集样品进行方法对照,SHERLOCK-LM方法在两者的检测差异较小,说明该方法也适用于未经前增菌处理的食物样品。针对实际样品的检测结果与q PCR一致,该方法进一步提升了检测敏感度和稳定性,实用性强。