论文部分内容阅读
本文以马鹿鹿腿骨为原料,制备出鹿骨胶原蛋白,对胶原蛋白的相关特性进行研究,并对其抗氧化活性进行研究。(1)以新鲜马鹿鹿腿骨为原料,采用双酶酶解法制备鹿骨粉;通过单因素试验并正交优化确定出鹿骨双酶法酶解的最佳工艺条件,最佳工艺条件为:碱性蛋白酶在pH 9.0、温度50℃的条件下水解时间为3h,再在pH 8.0、温度37℃条件下,加入胰蛋白酶水解2h,此时的水解度为12.72%,分别是碱性蛋白酶和胰蛋白酶最大水解度的1.84倍和1.39倍。(2)采用酸法加酶法的提取工艺制备鹿骨胶原蛋白,用0.5mol/L的冰醋酸及6000U/g的胃蛋白酶在4℃条件下进行水解提取,在单因素试验的结果基础上,采用响应面优化试验优化鹿骨胶原蛋白的提取的最佳工艺参数,优化出的最佳工艺参数为:加酶量6000U/g,提取时间48h,液料比15:1,此时胶原蛋白的特征氨基酸羟脯氨酸的得率为40.86%。经紫外全波长扫描分析,鹿骨胶原蛋白在234nm处有最强吸收峰,符合胶原蛋白特征吸收峰在230nm处的特性;鹿骨胶原蛋白的红外谱图显示出其含有4个酰胺段,显示出蛋白质的特征吸收,且鹿骨胶原蛋白的具有较高的氢键结合能力;鹿骨胶原蛋白形成凝胶的能力要强于牛骨胶原蛋白和猪骨胶原蛋白;DSC扫描分析,鹿骨胶原蛋白的热转变温度为119.3℃;经SDS-PAGE电泳表明,鹿骨中含有分子量为95KDa的胶原蛋白,并有一个分子量大于130KDa的胶原蛋白,牛骨和猪骨的分子量范围与鹿骨大致相同;通过扫描电镜分析,鹿骨胶原蛋白呈纺锤型,与哺乳动物的类似;鹿骨胶原蛋白的氨基酸组成成分分析则表明其为典型的胶原蛋白氨基酸组成。(3)采用分子量5KDa的透析袋及Sephadex G-25对胶原蛋白进行纯化,得到分子量大于5KDa、1-5KDa、小于1KDa三个分子量范围的胶原蛋白;三种不同分子量的样品都显示出较强的·OH和DPPH·自由基清除能力,明显高于阳性对照;当胶原蛋白质量浓度呈上升趋势时,不同分子量的胶原蛋白样品的自由基清除能力逐渐增加;且分子量越小,自由基清除能力越强;胶原蛋白对超氧阴离子O2-·有一定的清除效果,当胶原蛋白质量浓度增加时,超氧阴离子清除率呈上升趋势,但是与VC相对,超氧阴离子清除效果并不明显。