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多酚类化合物具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗凝血等多种生物活性,已成为国内外学者的研究热点。褐藻是天然多酚的重要来源,在已报道的褐藻种类中,生长于温带-亚热带的羊栖菜是具有高酚含量的代表性种属。本实验选用羊栖菜为实验原料,通过单因素试验结合正交试验,考察了料液比、提取时间、提取温度和乙醇浓度对多酚提取得率的影响,建立了羊栖菜多酚的最佳提取工艺;使用分级萃取、萃取-树脂联用和Sevag处理法对羊栖菜多酚粗品进行纯化,并针对萃取-树脂联用法建立了优化的实验方法;对3种提取方法所得的七个组分进行了HPLC分析,并考察了其体外对HepG2、RAW264.7、HT29和A-549四种肿瘤细胞的抑制作用,所得的实验结果如下。1.得到了羊栖菜多酚优化的提取工艺为:乙醇浓度45%;料液比1:30;提取时间7h;提取温度70℃。在此最佳提取工艺条件下,总酚含量为4.85±0.06mgGA/g,样品冻干后检测总酚含量为1.5%。2.采用了3种方法对多酚粗提物进一步分离:a.以乙酸乙酯、正丁醇对多酚粗品进行分级萃取,得到乙酸乙酯相(E1)、正丁醇相(E2)和水相(E3)三个组分;b.以乙酸乙酯对多酚粗品进行初步萃取,再以大孔树脂ADS-21对其水相进行分离纯化,具体分离的优化条件为,使用大孔树脂ADS-21,上样流速1mL/min、上样体积0.3BV、上样液pH4.5、70%乙醇为洗脱剂、洗脱流速1mL/min、洗脱体积为2.6BV,此萃取-树脂联用法分离纯化得峰1(R1)和峰2(R2)两个组分;c.以Sevag法结合乙醇沉淀对多酚粗品进行分离得0-70%醇沉物(S1)和70-90%醇沉物(S2)两个组分。上述7个组分的多酚纯度分别为8.8%、6.1%、3.8%、6.9%、4.0%、4.6%、5.3%均高于粗提物。对这7个组分进行了高效液相分析,除E1外,均适用HILIC色谱柱分析。3.体外抗肿瘤活性研究表明,上述七个组分在0.8mg/mL的浓度下,对肿瘤细胞增殖均具有不同抑制作用。具体为:羊栖菜的多酚粗品(C1),仅对RAW264.7具有明确的抑制作用;E1对四种肿瘤细胞均具有强抑制作用,抑制率达80%以上;E2对HepG2和RAW264.7的抑制活性较强,均达80%以上;E3、R1、R2、S1和S2几种基于水相的组分,抗肿瘤活性均不甚显著,但S1对RAW264.7有明显抑制作用。本研究为羊栖菜多酚的利用与开发提供了理论依据,为抗肿瘤成分的进一步纯化和活性验证提供了可行的技术路线,对褐藻中以酚类为代表的极性化合物的分离纯化以及活性研究具有指导意义。