【摘 要】
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食源性致病菌是指以食品为载体而导致人类发生疾病的一大类细菌。食源性致病菌污染食品给人们的健康造成极大威胁,是食品安全领域重点关注的问题之一。传统平板计数法由于耗时长已经不能满足食源性致病菌的检测需求,因此,建立能够快速鉴别与检测食源性致病菌的新方法,不仅可以准确诊断疾病起因、有效预防疾病发生,而且具有重要的理论价值和实际意义。本实验基于稀土上转换纳米材料独特光学性能以及作为荧光探针抗干扰能力强等优
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食源性致病菌是指以食品为载体而导致人类发生疾病的一大类细菌。食源性致病菌污染食品给人们的健康造成极大威胁,是食品安全领域重点关注的问题之一。传统平板计数法由于耗时长已经不能满足食源性致病菌的检测需求,因此,建立能够快速鉴别与检测食源性致病菌的新方法,不仅可以准确诊断疾病起因、有效预防疾病发生,而且具有重要的理论价值和实际意义。本实验基于稀土上转换纳米材料独特光学性能以及作为荧光探针抗干扰能力强等优点,首先制备了红(R)、绿(G)、蓝(B)三种具有不同发射波长的上转换纳米材料,通过反相微乳液法利用配位聚合物、碳量子点、共聚物对三色上转换纳米材料进行修饰,合成了三种功能化上转换纳米探针(R-UCNPs@COOPs,G-UCNPs@CQDs,B-UCNPs@COPs)。基于该系列探针构建了一个16通道的荧光传感器阵列用于食源性致病菌的鉴别。通过单一变量原则优化了探针浓度及共孵育时间,结果表明:R-UCNPs@COOPs、G-UCNPs@CQDs和B-UCNPs@COPs的最佳使用浓度分别为1.8mg·m L-1、0.7 mg·m L-1和1.1 mg·m L-1,最佳孵育时间约为8 min。在最优条件下,利用该传感器阵列对包括5种革兰氏阴性菌(大肠杆菌、鼠伤沙门氏菌、阪崎杆菌、志贺氏菌和副溶血性弧菌)和2种革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特菌))在内的7种常见食源性致病菌进行鉴别研究,结果表明:传感器阵列展现出良好的识别能力,区分度为100%。通过进一步优化移除5个响应通道后,构建的11通道传感器阵列,对7种菌仍能实现100%区分。同时,利用该传感阵列对耐药与非耐药菌进行区分,准确率为100%。我们进一步考察了该传感阵列对混合菌(革兰氏阳性混合菌、革兰氏阴性混合菌、革兰氏阳性和阴性混合菌)的识别,传感器阵列仍能够准确识别目标菌(准确率为100%)。最后,以牛奶和猪肉为实际样,评价了该传感阵列的鉴别性能。通过以上研究表明:所构建的传感器阵列有望用于食源性致病菌的快速识别与鉴定。
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近年来,通过分子印迹手段实现蛋白质高选择性识别与高效分离的相关研究越来越受到相关领域研究者的关注,然而目前仍然存在蛋白模板稳定性较差与印迹识别层的形成难以控制等困难。针对蛋白模板稳定性较差的问题采用蛋白的抗原决定基肽段取代整个蛋白作为模板,并通过可逆加成-断裂链转移(RAFT)策略对形成印迹识别层的聚合过程进行调控。本文首先以二氧化硅微球为基质,通过共价相互作用将模板细胞色素C的N-末端九肽抗原决
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