论文部分内容阅读
背景:神经退行性疾病是一种大脑和脊髓细胞神经元结构和功能丧失的疾病状态,影响人的记忆功能和运动功能,其病因和发病机制尚不明确。神经元不可再生,一旦损害不可恢复[1]。目前临床上对神经退行性疾病的治疗仅是通过少数几种药物延缓其发病的病程,治疗其缓解症状[2]。神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）可自我更新且具有分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力[3]。鉴于神经退行性疾病由于神经元不可逆的损害,神经干细胞治疗成为该疾病近几年来备受关注的治疗手段,但临床上获得大量的神经干细胞是比较困难的。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）作为种子细胞的来源已成为国内外学者探讨的热点,胎盘间充质干细胞（Human Placenta Derived Mesenchymal Stem Cells,hPDMSCs）来源丰富,采集方便,免疫原性极低,且具备多种分化潜能,有资料显示,胎盘间充质干细胞有神经分化的能力,但其分化成的神经细胞具有有限的再生能力,对其是否可以诱导分化为神经干细胞尚不清楚。目的:通过对人胎盘间充质干细胞的分离、培养、鉴定,研究其向神经干细胞的分化情况,为临床干细胞治疗神经退行性疾病提供理论依据。方法:从北京市海淀区妇幼保健院选择足月剖宫产孕妇的胎盘,通过对胎盘机械分离及酶消化的方法分离得到胎盘间充质干细胞,用含10%FBS的培养基进行细胞贴壁培养、传代及冻存,应用流式细胞技术检测胎盘间充质干细胞表面特异标志物的表达,经过成骨、成软骨及成脂诱导培养基的诱导培养21天后,用茜素红、甲苯胺蓝、油红O进行细胞染色,观察胎盘间充质干细胞的分化潜能。将用神经营养因子bFGF、EGF添加N2和B27分三步将胎盘间充质干细胞分化为神经干细胞,待细胞长满后用0.0125%的胰蛋白酶进行消化,并对分化得到的神经干细胞进行免疫荧光检测,检测神经干细胞表面标志物的表达情况。结果:体外分离培养人胎盘间充质干细胞形态类似成纤维细胞,呈梭形贴壁漩涡状生长,流式细胞术检测发现细胞高表达CD90、CD73C、CD105以及CD146,而CD34、CD31、CD45RA以及HLA-DR表达均为阴性。胎盘间充质干细胞诱导21天后,经过茜素红染色后细胞出现着色为红色的钙结节,经甲苯胺蓝染色后细胞染成蓝色,经油红O染色后细胞出现红色的圆形脂滴。经神经诱导后,细胞胞体缩小,折光性变强。由成纤维状细胞变为大小不等的球形细胞生长,经免疫荧光检测,由胎盘间充质干细胞不表达SOX1、PAX6和Nestin,而分化成的神经细胞干细胞高度表达SOX1,PAX6和Nestin。结论:本实验通过机械法和酶消化的方法成功的分离出了胎盘间充质干细胞,胎盘间充质干细胞的生物学特性与其他来源的间充质干细胞的相似,并具有向成骨、成软骨及成脂细胞的分化潜能;经神经营养因子诱导后可成功得到神经干细胞,为临床上得到大量的神经干细胞治疗神经退行性疾病提供了理论基础。