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目的：本研究的目的是对宫颈癌发生发展机制分子基础进行研究,通过构建特异microRNA重组质粒转染细胞,进行靶基因调控功能的研究,并探索化疗药物作用对miR-34a表达的影响,探讨miR-34a在宫颈癌发展中的调控机制,同时也为研究靶基因治疗宫颈癌的分子生物学机制提供一些线索。 方法：(1) 利用PCR技术从人基因组cDNA中获取miR-34a前体并构建pEGFP-C1/miR-34a真核表达质粒。(2) 将pEGFP-C1/miR-34a和pEGFP-C1(阴性对照)质粒用脂质体法转染Caski细胞,通过G418筛选后,挑取阳性克隆扩大培养,real-time RT-PCR鉴定细胞中miR-34a表达。(3)阿霉素与顺铂联合用药作用于Caski细胞, Real-time RT-PCR检测阿霉素与顺铂联合用药作用对caski细胞miR-34a表达的影响。(4) MTT法检测联合用药及miR-34a对Caski细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测联合用药及miR-34a对Caski细胞周期的影响,RT-RCP检测细胞周期基因CDK4,CDK6, CyclinE2,E2F1mRNA表达水平,western Blotting检测细胞周期基因CDK4,CDK6, CyclinE2,E2F1蛋白表达的改变,由此判定miR-34a在Caski细胞中抗肿瘤作用的效果。 结果：(1)成功构建pEGFP-C1/miR-34a真核表达质粒,经酶切和测序鉴定完全正确。(2) 将构建好的质粒转染Caski细胞,通过G418筛选后,建立了稳定稳定表达miR-34细胞株及对照细胞株pEGFP-C1。(4) MTT提示miR-34a以及阿霉素与顺铂联合用药能够显著的抑制Caski细胞增殖。(5) 将上述稳定表达的细胞株及药物处理细胞用流式细胞仪检测,miR-34a组细胞周期G0/G1期百分率显著增加,miR-34a下调细胞周期基因CDK4,CDK6,CyclinE2,E2F1mRNA及蛋白水平的表达；。(6) 阿霉素与顺铂联合用药能够显著增加Caski细胞miR-34a的表达,使细胞周期基因CDK4,CDK6, CyclinE2,E2F1mRNA及蛋白水平的表达明显下调。 结论：(1) 建立了稳定表达miR-34a的细胞株；(2) miR-34a以及阿霉素与顺铂联合用药均能够显著的抑制Caski细胞增殖；(3) miR-34a使细胞周期停滞于G0/G1期,下调细胞周期基因CDK4,CDK6,CyclinE2,E2F1mRNA及蛋白水平的表达；(4)阿霉素与顺铂联合用药能够显著增加Caski细胞miR-34a的表达,下调细胞周期基因CDK4, CDK6,CyclinE2,E2F1mRNA及蛋白水平的表达,提示miR-34a有可能作为宫颈癌基因治疗的新靶点。