论文部分内容阅读
目的:研究脐血源性T淋巴细胞(cord blood-derived T lymphocytes,CBTLs)在小鼠体内存活、浸润情况以及对红白血病(erythroleukemia,EL)小鼠的治疗作用,为深入探讨CBTLs的生物学特性及其生物治疗白血病提供实验和理论依据。方法:用密度梯度离心分离脐血单个核细胞(cord blood mononuclearcells.CBMNCs),加植物血凝集素(PHA)诱导活化为T淋巴细胞;分别经腹腔或尾静脉注射移植入正常BABL/C小鼠体内,采用免疫荧光(immunofluorescence,IMF)和免疫组织化学法(immunohistochemistry,IMC)观察CDTLs在小鼠体内的存活时间及迁移状况;建立EL小鼠模型,将CBTLs经腹腔移植入EL小鼠体内,运用免疫荧光、图象分析和透射电子显微镜等方法,观察脐CBTLs在小鼠体内的浸润状况及其对EL小鼠肝、脾形态结构的影响。结果:(1)诱导活化的细胞大部分为CD3~+T淋巴细胞,阳性率可达(83.42±1.26)%;(2)分别经腹腔或尾静脉注射人CBTLs后,第3、7、14天均可在小鼠外周血和脾中检测到人CD3~+和Brdu~+标记的T淋巴细胞,肝脏中没有发现人CD3~+和Brdu~+细胞;(3)两实验组(experimental group,EG)EL小鼠肝、脾组织中均发现CD25~+细胞散在浸润;(4)两实验组EL小鼠平均存活时间分别为27.25±7.06天和18.74±2.93天,与对照组(control group,CG)比较,均有统计学意义(P＜0.05);两实验组比较,亦有统计学意义(P＜0.05);(5)免疫组织化学显示,Caspase-3和Bc1-2主要在胞浆内表达,图像分析系统检测阳性细胞的光密度(optical density,OD)值,实验组Caspase-3表达增强,Bc1-2表达降低,与对照组较,均有统计学意义(P＜0.05);(6) Hoechst33258染色法检测显示,在荧光显微镜下见对照组细胞核荧光均匀,凋亡细胞较少;实验组部分白血病细胞呈现凋亡的形态学改变:染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解成碎块状,边缘光滑清晰;(7)透射电镜下见对照组小鼠脾脏中白血病细胞广泛浸润;实验组部分白血病细胞呈现典型的凋亡形态学改变:核染色质浓缩、边集;核碎裂,可见凋亡小体,粗面内质网(rough endoplasmic reticulum,RER)扩张,线粒体呈现空泡样变及髓样变。结论:(1)CBMNCs经PHA诱导可得到大量T淋巴细胞。(2)CBTLs能由腹腔迁移至小鼠的外周血,并能在小鼠周围淋巴器官,如脾脏中定居,这为CBTLs在小鼠体内适当部位发挥有效的免疫应答提供了物质保证。(3)T淋巴细胞移植组EL小鼠肝、脾均发现CD25~+细胞散在浸润,表明人CBTLs能在小鼠体内活化并趋化至白血病细胞浸润部位,发挥相应的功能。(4)经腹腔注射CBTLs能延长EL小鼠存活时间,对白血病有一定的治疗作用。