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1目的焦苍术为较常用健脾止泻药,主要用于脾虚引发的久泻久痢等症,目前关于焦苍术止泻作用部位及机制研究较少。本研究通过对比焦苍术不同提取物的抗腹泻药效作用,明确焦苍术的主要止泻作用有效部位,并通过对焦苍术产生抗腹泻作用的分子机制做进一步研究,初步明确其药效作用机制,为进一步拓展焦苍术的临床应用提供参考。2方法2.1焦苍术抗腹泻效应部位筛选研究以Wistar大鼠为研究对象,分为7组,每组10只,采用大黄造脾虚泄泻模型,分别给与焦苍术醇提物高、低剂量,焦苍术水提物高、低剂量以及参苓白术散治疗,连续给药治疗7天。以大鼠体重、粪便含水率、腹泻等级评分为指标,并观察结肠病理切片,考察各组的抗腹泻作用,比较作用强弱。2.2焦苍术醇提物抗腹泻药效学研究首先将Wistar大鼠分为5个组别,每组10只,分别为正常组,模型组,焦苍术醇提物高、低剂量组,参苓白术散组,除正常组外,其余各组均以大黄造脾虚泄泻模型,之后连续给药治疗7天。以大鼠体重,粪便含水率,腹泻等级评分,胃动素MTL,胃泌素GAS,血清肿瘤坏死因子TNF-α,白细胞介素IL-10,等为指标,结合肠道病理切片较全面考察焦苍术醇提物的抗腹泻药效。2.3基于肠道通透性的焦苍术醇提物抗腹泻作用机制的研究以Wistar大鼠为研究对象,分5个组别,每组10只,分别为正常组,模型组,焦苍术醇提物高、低剂量组,参苓白术散组,除正常组外,其余各组均以大黄造脾虚泄泻模型,之后连续给药治疗7天。实验结束后,取血清测5-HT,取结肠组织用ELISA试剂盒检测5-HT3R和AQP3、AQP8的表达,用WB（免疫印迹）和IHC（免疫组织化学）方式检测结肠组织结构中紧密连接蛋白ZO-1和Occludin以及肌球蛋白轻链激酶MLCK、肌球蛋白轻链MLC的表达,并对P38MAPK信号通路进行了检测,进一步探究焦苍术醇提物的抗腹泻作用机制,明确其作用途径。2.4基于16SrDNA的焦苍术醇提物对肠道菌群的影响研究采用Wistar大鼠为研究对象,分5组,每组10只,分别为正常组,模型组,焦苍术醇提物高、低剂量组,参苓白术散组,除正常组外,其余各组均以大黄造脾虚泄泻模型,之后连续给药治疗7天。实验结束后用灭菌EP管采取大鼠结肠内容物或者粪便,置于-80℃或者液氮中保存,采用16sRNA技术对大鼠肠道内容物或粪便中微生物进行分析,明确其结构及丰度组成,进一步明确焦苍术对肠道微生态的影响。3结果3.1焦苍术抗腹泻效应部位筛选研究相对于模型组,焦苍术水提物和焦苍术醇提物高剂量组大鼠体重明显增加;粪便含水率和腹泻等级评分显示,两者虽然都能够降低粪便含水率和腹泻等级评分,但焦苍术醇提物高剂量组效果明显优于水提物高剂量组,并且根据HE染色切片观察提示,在降低肠道炎症及保护肠道损伤方面,焦苍术醇提物高剂量组效果最佳,其次为焦苍术水提物高剂量组,其余各组则无显著性差异。综上所述,在同等剂量下,焦苍术的醇提物抗腹泻药效明显优于水提物,因此确定焦苍术的主要止泻部位为其醇提部位。3.2焦苍术醇提物抗腹泻药效学研究与模型组相比,焦苍术醇提物高剂量组的体重明显增加,在粪便含水率和腹泻等级评分方面,两者都明显的降低。另外,通过研究发现焦苍术醇提物不仅可以降低肠道炎症保护肠道损伤,并且还可以降低大鼠体内整体的炎症水平。在影响胃肠动力激素方面,焦苍术还能够增加胃肠道动力激素的表达,改善胃肠功能障碍。通过对焦苍术抗腹泻药效的进一步研究表明焦苍术不仅可以显著缓解脾虚导致的腹泻,还能够抑制体内各种炎症的发生,并且还能恢复由于脾虚导致的胃肠功能障碍。3.3基于肠道通透性的焦苍术醇提物抗腹泻作用机制的研究通过对焦苍术抗腹泻作用机制的进一步探索发现,焦苍术醇提物可以降低大鼠体内5-HT及5-HT3R受体的表达,此外,焦苍术高剂量组可以增加AQP3和AQP8的表达,恢复水代谢异常。在保护肠道损伤方面,发现焦苍术高剂量组不仅可以促进肠屏障的完整性,增加紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,而且可以P38MAPK信号通路来抑制MLCK、MLC的磷酸化,降低PAR-2的表达水平,从而促进紧密连接蛋白的表达,进一步产生保护肠道的作用。3.4基于16SrDNA的焦苍术醇提物对肠道菌群的影响研究通过对各组大鼠体内肠道微生态的研究发现,各组大鼠体内的肠道菌群丰度组成各不相同,但均以Bacteroidetes（拟杆菌门）和Firmicutes（厚壁菌门）为主要组成菌落,在模型组中,大鼠体内显著增加了某些属的丰度,如梭状芽孢杆菌,副拟杆菌,幽门螺杆菌等,这些菌都可能导致腹泻的发生。在给予焦苍术治疗后,这些有害菌都有不同程度的下降。在焦苍术醇提物高剂量组中,Akkermansia（艾克曼嗜黏蛋白菌）和Lactobacillus（乳酸杆菌）等有益菌群的物种丰度明显上升,说明焦苍术醇提物可以通过抑制有害菌的产生,促进有益菌的生成,进而达到缓解腹泻的作用。4结论首先本文通过焦苍术不同提取物的抗腹泻对比研究,初步确证了焦苍术的主要止泻部位是醇提物部位。接着通过更加全面的指标评价了焦苍术醇提物的抗腹泻药效并对其机制进行了初探,结果发现焦苍术醇提物可以有效缓解脾虚引起的腹泻、改善肠道病理变化,可能与通过抑制P38MAPK信号通路从而抑制紧密连接蛋白的减少和保护肠屏障的完整性有关。另外,研究还发现焦苍术醇提物还可以调节肠道菌群改善肠道菌群结构,恢复肠道微生态水平。以上结果有助于我们了解焦苍术的疗效和机理,为拓宽焦苍术的合理应用进一步提供重要依据。