中药质量控制是中药现代化研究的核心问题之一。中药化学指纹图谱是对中药物质基础的一种整体表达方式,能较好地体现中药的复杂性和整体性,是目前被国内外广泛接受的一种有效的中药质量分析手段。本文以中药复方“清开灵”注射液为具体研究对象,围绕其质量控制难题,对中药化学指纹图谱方法学和应用技术进行了系统研究,创新提出多指标成分定量指纹图谱方法和二维指纹图谱方法,为中药注射剂质量控制提供了新的技术途径。 本文主要内容及学术贡献如下: (1) 研究建立了清开灵注射液组方药材的化学指纹图谱。组方药材的质量控制,是注射剂质量控制的基础。本文建立了清开灵注射液中最重要的三味组方药材栀子、板蓝根和金银花的指纹图谱,并用于各清开灵注射液生产厂家药材的质量评价;针对栀子药材中某些易挥发性成分,应用固体进样技术建立其DSI/GC/MS指纹图谱,本法快速、廉价、准确,可推广用于含挥发性成分药材的质量控制。 (2) 研究建立了清开灵注射液的化学指纹图谱。运用HPLC/UV方法建立了清开灵注射液的化学指纹图谱,着重表达栀子、板蓝根、金银花和水解液的相关成分信息。通过对清开灵注射液与各组方药材指纹图谱的相关性研究,对清开灵注射液指纹图谱中的主要指纹峰进行了归属。另外,针对清开灵注射液中胆酸类物质没有紫外响应的特点,本文研究建立了清开灵注射剂的HPLC/ELSD指纹图谱,并结合星座图聚类法,对来源于不同厂家及不同生产工艺的注射液样品进行了质量评价。 (3) 以中药有效组分为基点进行质量控制,研究提出了清开灵注射液多指标成分定量指纹图谱方法。清开灵注射液中主要有效组分为核苷类、环烯醚萜苷类、有机酸类、黄芩苷类和胆酸类等五类,根据各有效组分的不同化学性质和光学性质,采用蒸发光散射(ELSD)检测方法及其与二极管阵列检测器联用技术(DAD/ELSD),分别建立了清开灵注射液的HPLC/ELSD及HPLC/DAD/ELSD多指标成分定量指纹图谱,实现了上述五类有效组分的同时定量测定。所建立的两种多指标成分定量指纹图谱用于各药厂清开灵注射液的质量评价,取得了满意结果。 (4) 针对常用HPLC/UV指纹图谱的不足,创新提出一种二维指纹图谱质量控制方法。通过对DAD量测数据的主成分分析,得到融合了色谱和光谱信息的二维指纹图谱。与常见的HPLC/UV一维指纹图谱相比,二维指纹图谱的指纹信息更加丰富。本文应用二维指纹图谱评价了不同厂家和不同制备工艺的清开灵注射液样品的质量,发现二维指纹图谱能更有效地表达产品的质量信息。 (5) 研究了指纹图谱在清开灵生产工艺条件控制中的应用。通过采集清开灵注射液生产过程相关环节的样品,获取其HPLC/UV指纹图谱,从中分析制药工艺过程中化学成分的变化规律,据此诊断出制药工艺所存在的问题并提出工艺条件优化建议。研究结果表明,指纹图谱控制工艺条件后,各厂产品质量有了明显提高。