MiR-22调控FASN抑制黑色素瘤恶性进展的研究

来源 :南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:knh1988
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目的探究促癌基因FASN在黑色素瘤中的作用,并验证在黑色素瘤中miR-22调控FASN抑制黑色素瘤恶性进展。方法采用生物信息学技术预测可能与黑色素瘤结合的miRNAs,随后挑选可能的miR-22进行验证。通过40对临床样本检测miR-22在黑色素瘤中的表达水平,运用Pearson相关性分析检测miR-22和FASN的表达相关性;采用双荧光素酶报告基因实验验证其结合关系。为了探讨miR-22在黑色素瘤中的作用,我们在M21 和 A375 细胞中转染 miR-22NC,miR-22 mimics 和 miR-22 mimics+FASN-OE(overexperssion),采用qRT-PCR检测各组细胞miR-22的表达水平,随后运用CCK-8,EDU增殖实验,Transwell细胞迁移实验和Invasion细胞侵袭实验验证miR-22对黑色素瘤细胞的增殖,迁移能力以及侵袭能力的影响。qRT-PCR和Western blot法分别用于检测黑色素瘤FASN mRNA和蛋白表达水平。结果通过生物信息学方法预测发现,miR-22可能与促癌基因FASN结合,随后进一步验证,发现miR-22在黑色素瘤组织及细胞中表达降低,FASN在黑色素瘤组织中表达上调,同时Pearson相关性分析表明miR-22与FASN的表达呈负相关。细胞学实验证明,FASN促进黑素素瘤的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证发现,miR-22与FASN的3’-UTR有直接靶向结合。与miRNA-NC组相比,miR-22-mimics组细胞中miR-22的表达显著增加,同时FASN mRNA和蛋白质表达显著降低。与miRNA-NC组相比,转染miR-22-mimics后显著抑制了黑色素瘤细胞的增殖、迁移能力以及侵袭能力。此外与转染miR-22-mimics 组相比,miR-22-mimics+FASN-OE 组逆转了 miR-22-mimics 抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论miR-22在黑色素瘤中低表达,miR-22过表达后靶向FASN抑制黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-22是黑色素瘤的治疗靶点。
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