结核病是一个世界性的健康问题,每年约有300万的人死于这种疾病。这种可控的传染性疾病在近些年又有卷土重来的趋势,主要与艾滋病感染增加与耐多药结核病的增多有关。因此,结核病快速准确的早期诊断成为控制结核病流行的重要手段之一。本实验研究目的是通过构建结核菌CFP-10、Rv2626c蛋白表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并对表达产物进行纯化,以获得大量CFP-10抗原、Rv2626c抗原,同时对其免疫反应性进行鉴定评价,为探索重组多肽在结核病血清学诊断的应用奠定前期实验基础。根据结核菌编码CFP-10、RV2626c肽段的基因序列,通过Primer Premier 5.0引物设计软件,分析设计了特异引物,通过PCR技术从结核分枝杆菌137Rv基因组DNA扩增出CFP-10、Rv2626c蛋白基因片段,目的片段克隆到原核表达载体PET-30a中,成功构建N端带有6His-tag的融合表达载体。利用化学转化法将重组表达载体转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,PCR检测获得阳性的工程菌株；经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,本实验成功获得了能够表达目的重组蛋白的工程菌。经梯度实验确定了工程菌发酵最适温度为37℃,诱导4h后,可达到最大表达量。重组CFP-10蛋白与重组Rv2626c蛋白IPTG最适诱导浓度分别为2mmol/L、1.5mmol/L。表达方式分析发现重组蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式存在,并利用亲和层析法对重组蛋白进行了纯化。血清学诊断是结核病早期、快速诊断方法中的一种,联合使用重组纯化的特异性蛋白抗原可以改善这种方法检测结核病人的敏感性和特异性。本研究还将重组的CFP-10、Rv2626c蛋白组成联合抗原进行ELISA实验,结果显示检测结核病人血清抗结核抗体的敏感性为77.1%,检测健康查体者对照血清特异性为32.3%,表明联合抗原具有用于结核病的免疫学诊断试剂的价值。