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目的:肺癌耐药成为目前困扰肺癌治疗的棘手问题,亦是肺癌生存率一直得不到改善的重要原因之一。近年来,HIF-1α与肿瘤耐药关联倍受关注。本研究构建HIF-1α-shRNA重组质粒,应用新近发展的pll-DCIONP作载体,与常用的脂质体载体比较,转染耐顺铂肺腺癌,分析pll-DCIONP介导转染细胞可行性同时,从体外体内两个层面研究pHIF-1α-shRNA转染对耐顺铂肺腺癌细胞及其移植瘤生长与耐顺铂的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:1.针对HIF-1α设计RNA干扰作用靶点,构建pHIF-1α-shRNA重组质粒,半定量RT-PCR法分析pll-DCIONP及脂质体介导质粒转染A549/DDP细胞后HIF-1α、耐药蛋白MRP及LRP的mRNA的表达,细胞免疫化学法分析HIF-1α、MRP及LRP的蛋白表达,MTT法计算顺铂作用下不同组细胞的死亡率。2.建立移植瘤裸鼠动物模型,在外加磁场作用下,pll-DCIONP介导pHIF-1α-shRNA转染尾静脉注射裸鼠,观察记录裸鼠体重及移植瘤体积变化,计算肿瘤生长指数,HE染色观察处理后裸鼠肝肾组织病理,免疫组织化学法分析肿瘤组织HIF-1α、MRP及LRP的蛋白表达结果:1.成功构建了针对HIF-1α设计的pHIF-1α-shRNA质粒,pll-DCIONP介导转染相对效率高于脂质体介导(P＜0.01);2.pHIF-1α-shRNA质粒转染A549/DDP细胞后,HIF-1αmRNA及蛋白表达和MRP、LRP mRNA及蛋白表达均下降,pll-DCIONP介导组大于脂质体组(P＜0.01);HIF-1a mRNA及蛋白表达下调与MRP、LRPmRNA及蛋白表达的下调显著相关(r=0.900,0.915 P＜0.01)、(r=0.901,0.896 P＜0.01);3.转染后A549/DDP细胞对顺铂的耐药性降低(P＜0.05);4.成功建立裸鼠耐顺铂肺腺癌移植瘤动物模型,pll-DCIONP介导pHIF-1α-shRNA在外加磁场引导下靶向作用于移植瘤后,以肿瘤生长指数作为评价指标,单纯质粒转染组与对照组相比,肿瘤生长受抑制,质粒转染联合顺铂治疗组与单纯质粒转染组和单纯顺铂治疗组相比,肿瘤生长明显受抑制(P＜0.01),其中pll-DCIONP介导组作用明显强于脂质体介导组(P＜0.01);5.靶向作用后肿瘤组织HIF-1α蛋白表达下降,同时耐药相关蛋白MRP,LRP蛋白表达下降,pll-DCIONP介导组作用大于脂质体组(P＜0.01),HIF-1a蛋白表达下调与MRP、LRP蛋白表达的下调显著相关(r=0.918,0.906P＜0.01);6.pll-DCIONP介导pHIF-1α-shRNA转染治疗荷瘤裸鼠的肝、肾组织无明显病理改变。结论:1.成功构建了HIF-1α-shRNA质粒,pll-DCIONP介导相对转染效率高于脂质体介导。2.pHIF-1α-shRNA转染后,A549/DDP细胞HIF-1a mRNA及蛋白的表达明显下调,并可能通过某种机制使得MRP、LRP mRNA及蛋白的表达下调,从而提高了A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。3.动物实验证实pll-DCIONP介导pHIF-1α-shRNA质粒在外加磁场作用下可靶向作用于耐顺铂肺癌移植瘤,抑制其生长,并在一定程度上增强其对顺铂的敏感性;上述作用与肿瘤组织HIF-1α蛋白的表达下调的同时MRP、LRP蛋白的表达下调有关。4.pll-DCIONP在体内具有良好的生物安全性。