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【背景】肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种多因素和进行性的恶性心血管疾病,其主要的临床特征性表现是肺血管阻力和肺动脉压力的增加,最终导致患者右心衰竭甚至死亡。研究表明,肺血管重构是PAH肺血管重构的重要病理生理机制。我们前期研究发现,真核翻译起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)在与低氧诱导的肺高压(pulmonary hypertension,PH)肺血管重构中起重要作用,但其机制尚未清楚。研究发现,自噬可促进野百合碱诱导的PAH肺血管重构。基于eIF2α在低氧诱导的PH肺血管重构中发挥重要作用,而自噬也参与调节PAH肺血管重构,因此,我们推测在野百合碱诱导的PAH肺血管重构中,eIF2α很可能通过自噬而在PAH肺血管重构中发挥重要的作用。【目的】(1)确证eIF2α在野百合碱诱导的PAH肺血管重构的重要作用;(2)阐明eIF2α促野百合碱诱导的PAH肺血管重构肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖由自噬所介导。【方法】(1)动物实验:150~200 g SD大鼠用野百合碱60 mg/kg一次性腹腔注射诱导PAH模型,4周即可成模。4周后右颈外静脉插管测定平均肺动脉压(mPAP)及右心室收缩压(RVSP),分离并称重右心室(RV)、左心室加室间隔(LV+S),测量胫骨长度,计算RV与(LV+S)及胫骨长度与右心室的比值;部分肺组织5%甲醛固定,石蜡包埋用于观察肺血管重构现象;Real-time PCR检测增殖标志物Ki67、PCNA以及eIF2α的mRNA表达情况;Western-blot检测p-eIF2α、eIF2α、自噬蛋白标志物LC3B、p62蛋白表达情况。(2)细胞实验:取SD大鼠原代PASMCs,用第3代细胞进行免疫组化(α-actin)鉴定细胞,3-8代用于实验;PASMCs经PDGF诱导增殖,CCK-8检测增殖情况;运用eIF2αsiRNA技术,以确证eIF2α对自噬及PASMCs增殖的重要调节作用;氯喹处理PASMCs抑制自噬,以确证自噬介导eIF2α促PDGF诱导的PASMCs增殖PAH肺血管重构。Real-time PCR检测Ki67、PCNA的mRNA表达,Western-blot检测eIF2α、LC3B、p62蛋白表达情况。【结果】与正常对照组相比:(1)野百合碱诱导的PAH大鼠中mPAP、RVSP显著升高,RV/LV+S及右心室与胫骨长度的比值显著升高,HE染色显示肺血管发生显著重构,血管中膜厚度百分比也显著增加,说明野百合碱诱导的SD大鼠肺动脉发生了明显的肺血管重构;(2)Real-time PCR结果显示在中膜中增殖标志物Ki67、PCNA mRNA表达显著上调,说明野百合碱诱导的PAH中PASMCs增殖明显,以上结果说明野百合碱诱导PAH的模型建立成功。(3)PAH模型中大鼠肺动脉组织eIF2αmRNA表达上,Western-blot结果显示p-eIF2α水平升高,eIF2α、LC3B的蛋白表达显著上调,而p62蛋白表达明显下调,说明eIF2α、自噬在野百合碱诱导的PAH肺血管重构的模型中被激活;(4)PDGF诱导PASMCs增殖,同时显著上调eIF2α及LC3B蛋白的表达,下调p62蛋白的表达,表明eIF2α在PDGF诱导PASMCs增殖的细胞模型中是激活的,自噬同样也被激活;eIF2αsiRNA可抑制由PDGF引起的eIF2α、LC3B蛋白表达上调及p62蛋白表达的下调;(5)eIF2αsiRNA可抑制PDGF诱导的PASMCs增殖;(6)氯喹可引起LC3B、p62蛋白的表达上调,并抑制PDGF诱导的PASMCs增殖。【结论】野百合碱可激活eIF2α,活化的eIF2α可促进自噬的激活从而促进PAH肺血管重构PASMCs增殖,靶向抑制eIF2α为PAH的防治提供新靶点和新思路。