目的：探索UPLC-MS/MS在检测兽药残留中的应用方法。应用超高效液相色谱三重四极杆质谱联用方法，以罗红霉素作为内标物，多反应监测定量，建立了同时测定蜂蜜中红霉素(ERM)、竹桃霉素(OLE)、克拉霉素(CLA)、麦迪霉素(MID)、阿奇霉素(AZI)、泰乐菌素(TYL)、螺旋霉素(SPI)、交沙霉素(JOS)、吉他霉素(KIT)、替米考星(TILM)、林可霉素(LIN)和克林霉素(CLIN)等12种大环内酯类和林可酰胺类药物多残留检测的方法。同时研究不同前处理方法的可行性，最大程度上优化前处理方法。　　方法：称取混合均匀的试样1.00±0.01g，置于10mL具塞离心管中，加入500μL2mol/L乙酸铵水溶液调节pH值至中性、加入20μL内标物罗红霉素(1.0mg/L)，加20％甲醇水溶液至5.0mL，旋涡混匀，超声5min充分提取。取上清液1.0mL于safe-lock尖底离心管中，12000rpm离心5min，取中层清液待测。流动相A为含0.5％甲酸的5mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B为甲醇液，流速为0.200mL/min，采用梯度洗脱，样品经ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱分离后串联质谱电喷雾正离子多反应监测模式检测，基质匹配标准内标法定量。　　结果：(1)中性的pH环境是有效提取蜂蜜中的大环内酯类和林可酰胺类抗生素首要保障。(2)采用反相液相色谱分离结合在线切换阀流路切换技术能达到反相固相萃取去杂质的效果。(3)在大环内酯类和林可酰胺类抗生素残留检测中，使用正己烷脱脂和0.22μm的滤膜过滤，某些待测物损失严重。(4)在流动相中加入少量的有机酸可以促进待测物更好的电离，提高检测灵敏度。(5)对本法的线性，灵敏度，选择性，检测限，定量限，准确度和精密度等各方面进行方法学验证。大环内酯类和林可酰胺类抗生素残留的检测限为0.1μg/kg～1.0μg/kg(S/N=3)，定量限为0.3μg/kg～3.0μg/kg。在0.5μg/kg～180μg/kg的加标范围内，平均加标回收率全部在94%以上，相对标准偏差1.3％～14.7％(n=6)。　　结论：本研究建立的UPLC-MS/MS检测方法，充分把握和利用了该仪器可以在线流路切换的技术，无需固相萃取等复杂样品前处理技术。样品经溶剂溶解后直接进样分析，结合在线流路切换技术去除高极性和低极性杂质，可以快速检测蜂蜜中12种大环内酯类和林可酰胺类抗生素残留。此方法快速、灵敏、准确，可以满足大批量样品高灵敏的测定，为食品安全提供可靠的确证检测方法。在一次实验中可以对蜂蜜中多种药物残留同时检测，在国际同类检测中达到先进水平。