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背景和目的 随着糖尿病发病率的增加，糖尿病微血管病变也逐年增多，免疫机制可能参与其发病过程。同时糖尿病患者易合并感染，可能与T淋巴细胞亚群的变化、细胞免疫功能下降有关。T淋巴细胞按表面标志可分为CD4+和CD8+T细胞亚群，在识别、结合抗原和信号传递、活化中起重要作用。T淋巴细胞通过释放细胞因子参与糖尿病微血管病变和感染的进展。据此推测，T淋巴细胞和NK细胞功能紊乱，细胞因子分泌失衡可能是糖尿病微血管病变和易致感染的危险因素。本课题应用流式细胞仪单克隆免疫荧光法检测2型糖尿病患者外周血T淋巴细胞和NK细胞的水平，分别观察它们在2型糖尿病合并感染患者和2型糖尿病微血管病变中的变化，以了解T淋巴细胞亚群和NK细胞的变化与糖尿病感染及微血管病变的关系，为临床诊断和治疗提供一定的理论依据。 第一部分(糖尿病合并感染) 研究对象和方法 2型糖尿病组的诊断依据1997年美国糖尿病协会(ADA)提出的，1999年WHO建议的诊断和分型标准，病人来自浙江省金华市中心医院内分泌科住院病人。排除标准是：糖尿病急性并发症；恶性肿瘤；严重的心、肝、肺及肾病；自身免疫性疾 浙江大学硕士学位论文病；血液病；应激（包括外伤、手术、疼痛、精神刺激）等。入选病人共60例（男30例，女30例），平均年龄60．88土8．53岁（年龄范围40岁－78岁），汉族，无亲缘关系。根据有无感染将糖尿病病人分为2组：1．无感染组（GZ）：30例（男15例，女15例），经体格检查和常规辅助检查无临床感染症状体征：2．合并感染组（＊3）：30例（男 15例，女 15例人 经体格检查和辅助检查有明确的感染症状和体征，其中呼吸道感染门例，尿路感染6例，皮肤感染6例，胆道感染4例，肠炎、阑尾周围脓肿和附睾炎各1例。正常对照组（GI）：共30例（男17例，女门例），平均年龄58．10土8厂7岁（年龄范围42刁6岁X 为浙江省金华市中心医院体检正常者。糖尿病各组患者均接受日服降糖药／和胰岛素治疗，伴有高血压、高血脂、感染的患者接受相应的降压、降脂和抗感染药物治疗。 所有实验对象取隔夜空腹肘静脉血 lml，0．lml EDTA抗凝，取 CD3、CD4、CDS单克隆免疫荧光试剂（Opticlone Cat．No．1650）20ul加入全血 100ul中混匀，以试剂（0…k1。ne＊成．＊）1612）作为同形对照，暗处放置15～20加几 取＊K单克隆抗体免疫荧光试剂（IMMUNOTEC PN IM 2076）20UI加入全血 100ill 中，以试剂 （IMMUNOTEC PN IM 1203）作为同形对照，暗处放置 15～20min，再加入 lmlIMMUNOPREP试剂稀释。最后分别放入COULTEREPICSXL流式细胞仪进行免疫荧光检测，计算 CD3、CD4、CDS和 NK阳性细胞的百分率。 统计方法：计数资料用卡方检验；计量资料用X土S表示，二组间计量资料用止检验，多组间计量资料用单因素分差分析和单因素协方差分析，多组间两两比较用Student－Newman－Keuls法进行，Prto刀5为差异显著性标准（双侧人 结果 一、二型糖尿病无感染组和感染组与正常对照组各临床参数 GZ组空腹血糖（FPG）（9刀1士3．llrnmol几）和 G3组FPG（8石3土26Inunol／L）显著高于正常对照组（4．85土0．42tnmol几），P＜0刀1，但GZ和 G3组间无统计学差 2 浙江大学硕士学位论文异；GZ与G3组病程、糖化血红蛋白（HbAIC）和空腹C－肽水平无显著性差异；GI、GZ、G3三组年龄、体重指数（BMI）、血脂、血压无显著性差异。 二、2型糖尿病组与正常对照组 T淋巴细胞亚群和 NK细胞水平 2型糖尿病组CD3（56．45if3．27）、CD4＋（31．19is．34）及NK（15．12土7．05）细胞水平显著低 于正常对照组CD3（65．sl士6．54）、CD4＋（35．33士5．78）及NK（22．40士8．13）细胞水平，P＜0．05。2型糖尿病组CDS＋、CD4＋／CDS＋与正常对照组比较无统计学差异。 三、2型糖尿病无感染组和感染组 T淋巴细胞亚群和 NK细胞水平 G3组CD3（sl石0士13．79）、CD4＋（29．07士9．12）、CDS＋（ZI．40士9刀4）、NK （15．10士7．44）细胞水平低于 GI组 CD3、CD4＋、CDS＋（26．94士6．77）和 NK细胞水平，Pwto刀1；GZ组NK细胞（l．13士6．76）低于＊组，P＜0刀1；G3组CD3、CD4＋、CDS＋T细胞低于GZ组CD3（61．31士10．93）、CD4＋（3．32士7刀0）和 CDS＋ （26．18土6石2）T细胞，P＜0刀5；GZ与G3组NK细胞无统计学差异；GI、GZ、G3三组间 CD4＋／CDS＋T细胞比值无统计学差异。 四、相关性分析结果 30例正常对照组外周血 T淋巴细胞亚群和 NK细胞水平与 FPG、血脂、血压之间无相关关系。2型糖尿病及合并感染患者 CDS＋T细胞水平与血总胆固醇（TC）水平呈正相关，，0．仍0，卜0．O18，CD4VCDS＋T细胞比值与TC水平呈负相关卜0．434，P—0刀17，感染组NK细胞水