高碳水化合物日粮中添加茵陈蒿汤对大口黑鲈幼鱼生长、肝脏糖脂代谢及免疫的影响

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随着集约化水产养殖的快速发展,鱼粉和豆粕等蛋白源逐渐不能满足水产养殖业的需求,因而使用碳水化合物促进蛋白质沉积已经成为研究热点。然而过量添加碳水化合物也会造成鱼类生长性能降低、糖脂代谢紊乱和免疫力降低,尤其是大口黑鲈等肉食性鱼类。传统中药茵陈蒿汤在治疗肝脏代谢疾病上具有显著疗效,而在水产养殖上的应用仍有待研究。为了探究中草药添加剂茵陈蒿汤对大口黑鲈肝脏糖脂代谢紊乱及免疫力降低的改善作用,本实验设计6个处理:1个低碳水化合物日粮作为正常对照、5个含不同浓度茵陈蒿汤的高碳水化合物日粮,茵陈蒿汤浓度分别为0%、0.5%、1%、2%和4%。本试验研究了大口黑鲈幼鱼饲喂6种不同日粮10周后,对其生长性能、肝脏糖脂代谢和免疫功能的影响。研究结果如下:1、茵陈蒿汤对大口黑鲈幼鱼生长性能和抗病力的影响2%茵陈蒿汤显著改善了高碳水化合物对生长性能的不利影响(P<0.05),然而,4%茵陈蒿汤显著降低了体重(P<0.05),线性回归结果表明高碳水化合物日粮中YCHD最适添加量为1.79%。茵陈蒿汤显著改善了高碳水化合物日粮引起的肝体指数升高,且改善程度同茵陈蒿汤添加水平呈正相关(P<0.05)。鰤鱼诺卡氏菌攻毒试验结果显示2%和4%的茵陈蒿汤能够显著提高大口黑鲈的抗病力。2、茵陈蒿汤对大口黑鲈幼鱼肝脏脂质沉积的影响油红染色结果显示,高碳水化合物日粮导致肝脏脂滴明显增多,随着茵陈蒿汤添加量的升高,脂滴显著减少。茵陈蒿汤显著降低了肝脏和血浆中脂质含量(P<0.05),如:总胆固醇、总甘油三酯和游离脂肪酸。茵陈蒿汤显著提高了肝脏AMPKα、PPARα、PPARγ和PGC1α的相对表达量(P<0.05),显著降低了PI3K、AKT3及下游脂质合成关键基因(ACCA、SCD1和FAS)相对表达量(P<0.05)。肝脏β氧化关键基因(CPT1α)的相对表达量随着茵陈蒿汤水平升高而升高(P<0.05)。茵陈蒿汤显著提高了肝脏脂质摄取关键基因(CD36、fabp1和CETP)和脂质转出关键基因(apob100、MTP和PNPLA7)的m RNA水平(P<0.05)。因此,茵陈蒿汤通过抑制PI3K-AKT通路减少脂质的合成,以及激活AMPKPPARα通路促进脂质β氧化和转运,减少了肝脏脂肪的沉积。3、茵陈蒿汤对大口黑鲈幼鱼肝脏组织学和肝功能的影响组织学观察发现高碳水化合物日粮导致肝脏细胞肿胀,细胞膜破损,炎症细胞增多,细胞核向细胞膜移位;2%和4%的茵陈蒿汤显著改善了这种情况。茵陈蒿汤显著缓解了高碳水化合物日粮引起的肝脏和血浆中ACP、AKP、GOT和GPT酶活力升高(P<0.05)。茵陈蒿汤显著提高了内质网应激相关基因(IRE1、Eif2α、ATF6、XBP1和CHOPα)、自噬相关基因(LC3-2、BNIP3和P62)和凋亡相关基因(Caspase3、Caspase8和Caspase9)相对表达量(P<0.05),降低了抗凋亡基因bcl2的相对表达量(P<0.05)。茵陈蒿汤显著降低了肝脏促炎基因(TNF-α、IL-1β、IL-8、hepcidin1、NF-κB、COX2、CD80和CD83)和细胞坏死关键基因(RIPK3、MLKL和TNFR-1A)的相对表达量(P<0.05);促进了抗炎基因(IKBα和IL-10)m RNA的表达(P<0.05)。因此,茵陈蒿汤通过促进内质网应激反应和自噬来缓解高碳水化合物日粮造成的应激和损伤,促进程序性的细胞凋亡和抑制不可控的细胞坏死,进而减少炎性因子,增强肝脏免疫功能。
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